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铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是我国兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)的珍稀濒危特有种,具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、抗癌防老等功效,应用历史悠久。以其茎加工而成的名贵中药材“铁皮枫斗”价格昂贵,近年来铁皮枫斗商品市场鱼龙混杂,以假乱真、以次充好的现象屡现。本实验通过实时定量PCR技术与突变扩增阻滞体系(amplification refractory mutation system, ARMS)相结合的实验手段建立了一种快速而精准的传统中药材鉴定方法。这一方法能有效的区分铁皮石斛材料与混淆品,适用于新鲜的及干燥的材料,尤其适用于深加工的中药材。本论文以60种石斛材料的ITS序列比对结果为背景,以ARMS技术为指导设计了7对特异性ARMS引物。通过PCR扩增实验筛选出其中特异性最佳同时扩增效率最高的一对引物HT1/HT2。本文旨在建立一种基于SYBR GreenⅡ染料的荧光定量PCR方法,通过引物对HT1/HT2特异性扩增来分析鉴定铁皮枫斗。实验结果表明HT1/HT2引物对铁皮石斛的特异性荧光定量PCR扩增效果最佳。以HT1/HT2为引物的铁皮枫斗荧光定量PCR鉴别实验结果显示,当被测样品为铁皮石斛时,其Ct值约为20.48,而其他种类的石斛显示了更高的Ct值,结果为31.83±2.65。经统计学分析得两者具有显著性差异(P<0.001)。通过本实验的方法有效克服了枫斗中高含量多糖对DNA扩增的影响,有效区别由铁皮石斛D. officinale加工而成的铁皮枫斗及由其他石斛加工而成的其他枫斗。我们首次将荧光定量PCR技术应用于铁皮石斛药材铁皮枫斗的鉴别中,并结合了ARMS技术增强了引物的特异性。铁皮石斛扩增片段长度仅109bp,既很好克服了DNA片段在深加工过程中的降解带来的问题又大大缩短了扩增的时间提高了鉴定效率。这种将ARMS与荧光定量PCR相结合的方法是铁皮枫斗鉴定的重要方法,该方法显示了灵敏度高、可重复性强、便捷快速、应用性强等优点。