缺血性脑血管病是严重威胁人类健康与生存的疾病之一,具有高发病率高患病率、高致残率、高复发率、高死亡率的特点。它不仅严重损害了患者的生命质量和健康,也给家庭和社会带来了沉重的负担。因此,明确脑缺血损伤的生理病理机制,开发和研制出新型、有效以及副作用小的防治药物势在必行。脑缺血的生理病理机制十分复杂,研究认为其与缺血再灌注损伤后能量代谢障碍、自由基大量产生、扩血管物质与缩血管物质含量的变化、血小板激活等诸多因素相关。甾体皂苷(TSA)是知母的有效成分之一,研究表明知母皂苷对急性脑缺血再灌注损伤具有确定的保护作用,其机制涉及调控缺血脑组织血管内皮功能,抗血栓形成和改善血液流变学等方面,而对于脑缺血损伤恢复早期脑血流量和能量代谢的研究作者尚未见报道,本课题采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,观察TSA对脑梗死后脑血流量和能量代谢的影响,为其脑缺血疾病的临床应用提供实验依据,同时也为脑缺血最佳治疗时间窗之外的中药干预时间的合理性进行探索。本实验主要分为以下四个部分：第一部分TSA对实验性脑缺血损伤模型动物脑血流量的影响1、TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑血流量的影响方法：采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,用超声多普勒血流测定仪测脑血流量。结果显示：假手术组脑血流量基本无变化,模型组动物脑血流量变化率降低较明显。TSA各剂量组及银杏叶片组均可抑制脑缺血再灌注损伤大鼠脑血流量变化率的下降,与模型组比较差异显著(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.01),并呈现明显的剂量依赖关系。2、TSA对实验性急性脑缺血损伤小鼠脑血流量的影响方法：采用小鼠结扎双侧颈总动脉急性脑缺血损伤模型,用激光多普勒血流测定仪测缺血后5、10、15min脑血流量。结果显示：假手术组脑血流量基本无变化,模型组动物脑血流量描记图线明显下降。TSA各剂量组均能降低模型小鼠造模后5min,10min及15min时脑血流的下降幅度,与模型组比较差异显著。结论：TSA可抑制脑缺血损伤模型大鼠及小鼠脑血流量变化率的下降。第二部分TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑组织的保护作用方法：采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注损伤模型,测定脑组织NO含量、NOS活性、LA含量、LDH活性、MDA含量、SOD活性。结果显示：TSA60、30和15mg/kg可明显降低大鼠手术侧大脑NO含量(P<0.01)和TNOS活力(P<0.01)。TSA60和30mg／kg可明显降低大鼠手术侧大脑iNOS活力(P<0.01)；TSA60、30和15 mg/kg可明显降低大鼠手术侧大脑LA含量(P<0.01)；升高LDH活力(P<0.01,P<0.01,P<0.05)；TSA 60和30 mg/kg可明显降低大鼠手术侧大脑MDA含量(P<0.01),升高总SOD活力(P<0.01);TSA 30、15 mg/kg可升高大鼠手术侧大脑Cu-Zn SOD活力(P<0.05,P<0.01)。结论：TSA对脑缺血再灌注损伤后NO的含量有很明显的降低作用,对NOS活力也有明显的降低作用。提示TSA防治脑缺血再灌注损伤的作用机制可能是通过抑制iNOS的活力,减少NO的生成,从而减少神经的损伤,减轻脑缺血再灌注的损伤。TSA能升高脑缺血再灌注造成LDH的活力的降低,减少乳酸的生成,从而间接地减轻了酸中毒对神经元所造成的损伤。TSA可显著降低模型大鼠脑组织MDA的含量,提高SOD活力,显示该药对于脑缺血后氧自由基所引起的脑组织细胞脂质过氧化损伤具有一定保护作用。第三部分TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑组织能量代谢相关指标的影响1、TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑组织能量代谢相关指标的影响方法：采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注模型,测定脑组织Na+-K+ATP酶活性、Ca2+-Mg2+ATP酶活性及ATP含量。结果显示：TSA60 mg/kg可明显增强大鼠手术侧大脑Na+-K+ATP、Ca2+-Mg2+ATP的活力(P<0.01)。结论：TSA能改善脑缺血再灌注损伤时产生的能量代谢障碍,增加ATP的含量,改善细胞内外的离子交换,减少细胞内的Ca2+,增加细胞内的Mg2+,从而使细胞的代谢过程改善为良性循环。第四部分TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑血管收缩功能相关活性物质的影响方法：采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注损伤模型,测定脑组织血管活性肠肽、内皮素、血管紧张素。结果显示：TSA 60、30和15 mg/kg可升高大鼠右侧脑组织匀浆中VIP含量(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论：TSA对实验性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期脑组织有扩血管的作用,可增加脑血流量,减少脑组织损伤。第五部分TSA对ADP、胶原所诱导的血小板聚集的影响方法：采用TSA体外给药测定其对家兔血小板聚集的抑制作用,以比浊法测定血小板聚集功能。结果显示：随着TSA浓度的升高,其抑制血小板聚集作用明显增强,血小板解聚现象也逐渐增强,当TSA浓度达到1.4mg/ml时,几乎完全抑制血小板聚集。结论：TSA可以抑制由ADP、胶原诱导的家兔血小板的聚集,并呈剂量效应。结论知母皂苷(TSA)作为药物治疗后,MCAO大鼠脑血流量变化率有较明显的升高；双侧颈总动脉结扎致急性脑缺血模型小鼠脑血流量的变化率显著增加；NO含量及NOS活性显著降低；LA含量降低；LDH活力升高；MDA含量降低；SOD活性升高；能量代谢相关酶的活性提高；扩血管物质VIP含量增加；体外实验结果表明：TSA能剂量依赖性的抑制家兔血小板的聚集。上述实验结果说明TSA增加脑血流量,减轻能量代谢障碍,抗氧化损伤,均与其缺血后脑组织损伤保护作用相关