【摘 要】
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目的1.研究动脉粥样硬化模型小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的改变。2.探索Ghrelin对动脉粥样硬化小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的影响及可能的机制。3.探讨Ghrelin对ox-LDL培养下脑微血管周细胞的影响及p38MAPK-JNK信号通路在其中的调节机制。方法1.建立对照组（Control）、动脉粥样硬化组（AS）、Ghrelin干预组（Ghrelin）（共3组）小鼠模型,对照组小
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目的1.研究动脉粥样硬化模型小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的改变。2.探索Ghrelin对动脉粥样硬化小鼠血脂、炎症因子及脑微血管通透性的影响及可能的机制。3.探讨Ghrelin对ox-LDL培养下脑微血管周细胞的影响及p38MAPK-JNK信号通路在其中的调节机制。方法1.建立对照组（Control）、动脉粥样硬化组（AS）、Ghrelin干预组（Ghrelin）（共3组）小鼠模型,对照组小鼠给予普通食物,AS组及Ghrelin组给予高脂食物喂养12周,取主动脉根部组织切片HE及油红染色验证小鼠模型构建成功,第13周转为普通食物喂养,Ghrelin组另给予腹腔注射Ghrelin（100 ug/kg/次,2次/日）4周。2.ELISA及RT-qPCR检测血清炎症因子;ELISA检测血清中ox-LDL水平;Evan blue检测脑微血管的渗透性;HE染色观察脑微血管的形态、是否渗漏;CD31+PDGFR-β免疫荧光双标染色检测脑微血管周细胞的分布及数量;透射电镜观察小鼠脑微血管的结构;免疫印迹法（Western blot）检测小鼠脑组织PDGFR-β、p38 MAPK-JNK的表达变化。3.体外培养小鼠原代脑微血管周细胞,分别加入ox-LDL,Ghrelin和p38/JNK的调节剂Hesperetin处理;通过CCK-8、WB实验确定ox-LDL、Ghrelin、Hesperetin的最佳给药浓度;ELISA检测细胞培养上清中炎症因子含量,RT-qPCR检测细胞内炎症因子的表达;TUNEL检测细胞凋亡情况;WB检测p38 MAPK-JNK、Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3的表达情况。结果1.喂养12周后,Control组小鼠无动脉粥样硬化,AS组小鼠明显动脉粥样硬化,说明动脉粥样硬化模型构建成功;与AS组小鼠比较,Ghrelin组小鼠的血清ox-LDL及炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α含量明显下调。2.AS组小鼠BBB渗出的Evans blue染料比Control组小鼠明显增多,Ghrelin治疗组与未治疗的AS小鼠相比,BBB对Evans blue渗漏显著减少;此外,在透射电镜下观察到皮质区BBB紧密连接的超微结构:AS模型小鼠脑微血管中周细胞肿胀、形态异常,而Ghrelin干预能部分恢复周细胞的形态。3.IF双标染色显示AS模型小鼠脑微血管（CD31阳性）中周细胞（PDGFR-β阳性）数量减少,而Ghrelin干预能部分恢复周细胞的数量;WB结果表明AS模型小鼠脑组织中PDGFR-β（周细胞的标志物）下调,Ghrelin干预能上调PDGFR-β的表达;另外,AS模型小鼠脑组织中p-p38及p-JNK明显上调,而Ghrelin干预组脑组织中p-p38及p-JNK下调,说明脑微血管周细胞的减少可能是通过p38 MAPK-JNK信号所介导。4.ELISA检测结果表明:ox-LDL组周细胞培养上清中炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α含量明显增高,Ghrelin干预能显著下调周细胞培养上清中炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的水平;RT-qPCR结果也表明Ghrelin干预能显著下调周细胞内炎症因子IL-6、MCP-1和TNF-α的水平;Tunel检测结果表明,ox-LDL组周细胞凋亡增多,Ghrelin干预能减少周细胞凋亡;Western-blot检测结果提示,Ghrelin干预能下调周细胞p38 MAPK-JNK、Bax/Cleaved Caspase-3表达,上调Bcl-2表达;给予Hesperetin（p38 MAPK-JNK调节剂）处理后,能拮抗Ghrelin对周细胞炎症因子的调控、凋亡的调控及p38 MAPK-JNK的抑制作用。结论1.动脉粥样硬化小鼠血清炎症因子高表达,血脂水平升高,导致脑微血管周细胞数量减少、形态异常,脑微血管渗漏。2.Ghrelin下调动脉粥样硬化小鼠血清炎症因子及血脂水平,部分恢复周细胞的数量及形态,改善脑微血管的渗漏。3.Ghrelin通过p38 MAPK-JNK途径下调ox-LDL环境中周细胞的炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α水平,减少周细胞的凋亡。
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