背景:BDV是一种具有高度嗜神经性的单股负链RNA病毒,可持续性感染多种温血动物,包括人类[1],引起宿主产生焦虑、攻击、多动、认知缺陷等行为障碍,甚至可导致宿主发生致死性爆发性脑炎,同时许多研究表明,BDV感染与人类神经精神发育障碍性疾病密切相关[2]。近20年在对多个国家精神疾病患者的流行病学研究中发现,部分精神疾病患者的脑脊液、血液中可检测到BDV的抗体和核酸,故BDV又有“情感病毒”之称。在实验室新生SD大鼠感染模型(NBD模型)上,实验组出现了焦虑样行为[3],但BDV致宿主焦虑障碍的发病机制,尤其是BDV在宿主体内的作用靶点尚不明确。目前的研究表明BDV核蛋白质(BDV-N,P40)是其主要致病蛋白之一,BDV-N与宿主体内的哪些蛋白质结合而发挥致病作用是我们需要解决的主要问题。目的:本实验利用P40质粒构建过表达慢病毒LV5-P40,并利用慢病毒感染原代海马神经元,筛选出与P40结合的差异蛋白质,从而找出与P40相互作用的关键宿主蛋白质,并探索其致宿主焦虑障碍的发病机制。方法:1.构建LV5-P40过表达慢病毒。2.进行慢病毒滴度及MOI测定,并感染原代海马神经元,Western blot方法检测P40是否成功表达。3.提取感染后的原代海马神经元蛋白质做免疫共沉淀实验(CoIP),根据团队前期质谱结果进行再分析,选取差异蛋白质进行WB验证。4.继续验证通路下游蛋白质在转录水平和蛋白质水平的改变。结果:1.过表达慢病毒LV5-P40构建成功,测定滴度为1×109 TU/ml,能成功感染原代神经元并表达P40。2.免疫共沉淀复合物进行Co-IP实验成功验证出P40与5HT2CR有相互作用。3.感染BDV后,5HT2CR在转录水平和蛋白质水平表达量均增高,通路下游蛋白质GNAQ在转录水平和蛋白质水平表达量均降低。结论:我们首次发现BDV感染宿主后,关键蛋白之一P40与宿主海马神经元5HT2CR有相互作用。P40与5HT2CR结合后促使5HT2CR表达量增高,进而抑制其通路下游蛋白质GNAQ的表达。