目的:利用PCR、酶切及蓝白斑筛选技术,通过野生型、突变型质粒混合模拟不同比例检测EGFR基因19外显子缺失突变,建立一种快速、灵敏、廉价的EGFR基因诊断技术。方法:根据EGFR基因19外显子del E746-A750和del L747–S752 ins S缺失突变,即15碱基和18碱基缺失突变为检测靶点,分别设计相关配对引物,构建野生型及突变型质粒模版;设计一组特异性PCR引物,并以EGFR野生型、突变型质粒为模板模拟实际标本中野生型与突变型基因比例,进行插入片段的PCR扩增;结合蓝白斑筛选技术原理,野生型阅读框架中因含有终止密码子TAA,菌落呈白色,缺失突变型因丢失特定的一段核酸片段而不含有终止密码子TAA,故菌落呈现蓝色,以此确定样品有无EGFR基因19外显子的缺失突变;通过限制性内切酶酶切野生型片段,可以减少白色菌落克隆数量,间接富集突变型DNA,提高检测效率。结果:EGFR基因野生型插入片段分子克隆的菌落为白色,突变型插入片段分子克隆的菌落为蓝色。通过模拟野生型、突变型质粒不同比例,实验得出在仅有万分之一突变模板浓度(野生模板:突变模板=10000:1)时,该体系仍能检测到突变基因的存在。结论:本实验方法在不同比例模板检测中具有较高的灵敏性和特异性,对肿瘤的早期诊断和肿瘤复发监控具有应用价值,有巨大的经济和社会效益。