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目的:探讨在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者中血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)与疾病活性关系,探究不同疾病活动度患者循环血液中的外泌体(exosomes)浓度差异,以及外泌体内淀粉样蛋白A(amyloid A,AA)含量与疾病活动度的相关性,寻找其作为评价疾病进程的依据;研究不同疾病活动度患者循环外泌体是否具有免疫活性及其在自身免疫过程中的作用,推测不同疾病活动度下循环外泌体淀粉样蛋白A和其促炎潜能之间的联系,揭示RA炎症扩散外泌体途径的可能机制,为RA患者病程阶段性评估及用药疗效的预测提供新的诊断策略。方法:收集类风湿关节炎患者血清,采用疾病活动评分(DAS28-ESR)评估所有纳入RA患者的疾病活性。分组依据为:DAS28-ESR≤2.6为临床缓解期组(clinical remission,CR),DAS28-ESR>2.6为活动期组(non-clinical remission,n-CR)。ELISA检测两组患者血清淀粉样蛋白A与MMP-3含量,差速超速离心法提取血清外泌体,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD63与TSG101,并对外泌体做粒径及浓度分析,定量外泌体蛋白,ELISA检测外泌体内淀粉样蛋白A含量。采用Ficoll-密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞(peripheral blood monomuclear cell,PBMCs),台盼蓝染色检测活细胞比例,配制无外泌体细胞培养基,将上述两组患者循环外泌体与外周血单个核细胞共孵育24小时,收取细胞上清液,无外泌体刺激的细胞培养24小时的上清作为空白对照组,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(Interleukin 6,IL-6)及白细胞介素8(Interleukin 8,IL-8)。结果:1.RA活动期组血清淀粉样蛋白A、MMP-3水平显著高于临床缓解期组(P<0.0001)。2.临床指标相关性分析显示,SAA与血沉(erythrocytesedimentation rate,ESR)显著正相关(ρ=0.771,P=0.000),SAA与C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)显著正相关(ρ=0.601,P=0.000),SAA与类风湿因子(rheumatoid factors,RF)相关性较弱(ρ=0.343,P=0.003),SAA与MMP-3呈显著正相关(ρ=0.776,P=0.000);MMP-3与RF无显著相关性(ρ=0.204,P>0.05),但MMP-3与ESR(ρ=0.726,P=0.000)及MMP-3与CRP(ρ=0.601,P=0.000)显著正相关。3.从类风湿关节炎患者血清中提取外泌体,验证了外泌体表面标志蛋白CD63和TSG101,外泌体直径约为148nm,粒子浓度约为1.0E+11 Particles/m L。活动期患者血清中外泌体蛋白浓度[(4.32±2.28)μg/μL]显著高于临床缓解期患者血清中外泌体蛋白浓度[(1.97±0.87)μg/μL,P<0.0001];活动期患者外泌体内淀粉样蛋白A浓度[(47.73±29.82)ng/m L]显著高于缓解期[(16.61±18.58)ng/m L,P<0.0001];RA患者血清淀粉样蛋白A与外泌体淀粉样蛋白A显著正相关(ρ=0.601,P=0.000),外泌体淀粉样蛋白A与血清CRP呈显著正相关(ρ=0.571,P=0.001)。4.活动期组外泌体诱导PBMCs产生IL-6[(193.96±100.94)pg/m L]明显高于缓解组[(86.07±111.06)pg/m L,P=0.01],缓解期组IL-6与无外泌体刺激的空白对照组[(20.85±21.73)pg/m L,P>0.05]无差异。活动期组外泌体诱导PBMCs产生IL-8[(48.75±37.63)pg/m L]与缓解期[(29.65±19.83)pg/m L,P>0.05]相比无差异,但活动期组IL-8显著高于空白对照组[(11.45±5.87)pg/m L,P=0.0031],缓解期组IL-8显著高于空白对照组(P=0.0083)。结论:1.RA患者循环外泌体内淀粉样蛋白A水平与疾病活动度有关,并且外泌体内淀粉样蛋白A与血清淀粉样蛋白A及CRP有显著相关性,可以作为评估RA患者疾病进程新的生物标记物。2.RA患者循环外泌体具有免疫活性,其促炎效应与疾病活动性相关,外泌体淀粉样蛋白A可能在类风湿性关节炎的免疫调节中发挥了一定作用。