癌症作为死亡率和发病率仅次于心血管疾病的第二大疾病,严重危害人类的健康,在传统治疗手段无法更加有效地治疗癌症情况下,亟需新的癌症治疗方法提高癌症治疗效果。其中基于靶向基因-病毒的治疗策略中,溶瘤痘苗病毒凭借靶向性好、表达效率高、成本低廉、溶瘤效果好等优点,成为抗肿瘤研究的热点。凝集素作为能特异性识别糖基的糖蛋白,具有专一性的糖结合位点,可以专一性识别细胞表面受体。凝集素能特异性识别病变细胞的相应糖基序列,且来源不同的凝集素具有的功能不一,有些能够帮助自身抵抗外来微生物及有害物质的入侵,有些动物凝集素具有凝集肿瘤细胞的作用,因此将凝集素和溶瘤痘苗病毒联合作用可能会有较好的抗肿瘤效果。本课题通过构建携带云海绵凝集素(Aphrocallistes vastus lectin,AVL)基因的溶瘤痘苗病毒进行抗肿瘤研究。通过构建pCB-Flag-AVL质粒,野生型病毒WR和质粒共转染293A细胞包装出携带AVL基因的溶瘤痘苗病毒oncoVV-AVL。包装出的病毒经扩增纯化后,首先在体外实验上检测oncoVV-AVL的抗肿瘤效果。通过腺病毒和溶瘤痘苗病毒的细胞毒性实验探究AVL对肿瘤杀伤效果的影响,结果表明AVL的表达对肿瘤细胞具有细胞毒性,而且可以增强溶瘤痘苗病毒对肿瘤细胞的体外杀伤能力。我们进一步研究了 oncoVV-AVL潜在的抗肿瘤机制。通过TCID50法探究AVL对溶瘤痘苗病毒复制能力的影响,结果表明AVL能够显著提升痘苗病毒在肿瘤细胞中的复制能力。另外,AVL下调NF-κB2的磷酸化,NIK(NF-κB激酶)的表达水平以及上调ERK的磷酸化。为了验证ERK是否在oncoVV-AVL复制中起关键作用,我们利用MEK-ERK抑制剂U0126联合oncoVV-AVL处理肿瘤细胞,结果显示,oncoVV-AVL病毒复制能力完全依赖于ERK的活性。最后探究了小鼠体内oncoVV-AVL的抗肿瘤效果,结果显示oncoVV-AVL治疗后的小鼠肿瘤体积显著小于对照组,证明oncoVV-AVL在体内同样具有良好的抗肿瘤效果。海洋占具地球71%的面积,海洋资源丰富,具有广阔的开发前景,凝集素作为一类特异性糖基结合性糖蛋白具有与细胞结合,识别并凝集变异细胞等功能。本论文通过云海绵凝集素基因AVL的抗肿瘤研究,丰富了海洋生物资源利用的途径。携带海洋凝集素基因AVL的溶瘤痘苗病毒的抗肿瘤研究从一定水平上为溶瘤痘苗病毒抗肿瘤提供新证据,同时为溶瘤痘苗病毒抗肿瘤的新药研发提供科学依据,为寻找肿瘤治疗基因开辟了新的领域。