根癌农杆菌介导的淡紫拟青霉突变体的鉴定及其酶活分析

来源 :中国林业科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wjjun05
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根结线虫病是根结线虫引起的植物根部病害,每年在全世界范围内给农业和林业生产带来巨大的损失。淡紫拟青霉被认为是一种能有效防治根结线虫的生防真菌。但是关于淡紫拟青霉的致病机理的研究还很少,为了充分利用淡紫拟青霉,提高生物防治效果,本文在已构建的淡紫拟青霉突变体库的基础上,筛选突变体并研究表型性状,分析酶活力,为进一步的淡紫拟青霉致病机制分析及致病相关的基因克隆奠定基础。PCR检测筛选的14株T-DNA插入突变体,观察和测定菌落形态,菌落生长速率,产孢量,孢子萌发率和菌丝干重等生物学性状,并比较突变体致病力。结果表明突变体均含有beta-tubulin基因序列,T-DNA已整合进入野生型菌株20-7的基因组中。通过与野生型菌株对比,发现突变体菌落形态发生了不同程度的改变。菌落生长速率明显增大的菌株占全部菌株的85.71%,只有BN-11菌株的菌落生长速率降低。产孢量显著变大的菌株有BN-11和BN-12,为菌株总数的14.29%。孢子萌发率发生改变的菌株占78.57%。菌丝干重发生明显增大和减少的菌株分别都占全部突变体的21.43%。筛选获得了1株致病力增强的突变体BN-11和11株致病力显著降低的突变体。几丁质酶和蛋白酶的活力是评价淡紫拟青霉生物防治潜力的重要指标之一,本研究通过对淡紫拟青霉突变体的几丁质酶活力和蛋白酶活力分析,结果表明几丁质酶活力和蛋白酶活力由于T-DNA的插入均受到了不同程度的影响。野生型20-7菌株在第5d几丁质酶活力达到最大值2.2944 U/mL,野生型20-7菌株几丁质酶力比其它突变体菌株的酶活力几乎都要大,不同菌株的几丁质酶活力高峰出现的或早或晚。另一方面,野生型淡紫拟青霉20-7菌株在第6d产蛋白酶活力为2.6453 U/mL,为最大酶活力。淡紫拟青霉突变体BN-7的蛋白酶活力在所有菌株中一直处于最低值。
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