Macrolactins是一类新型大环内酯类化合物,具有抗菌、免疫抑制、抗肿瘤等多种生物学活性,在医药领域具有极大的应用前景。目前野生菌发酵产macrolactins的产量较低,限制了对此类化合物的研究与应用,因此改造相关生物合成基因簇以提高macrolactins的产量具有十分重要的意义。本文以实验室前期筛选获得的一株能产macrolactins的野生菌ZJU-2011为研究对象,通过测序确定其为一株新型的解淀粉芽孢杆菌,将其PKS基因簇中高保守的AT结构域及可能的启动子区域与参考基因簇进行比对,确定了该基因簇的存在并发现其启动子元件位于第一模块前1Kb左右的位置。以绿色荧光蛋白为报告基因构建启动子检测载体,与P43启动子比较确定该基因簇原始启动子为弱启动子,进一步研究发现原始启动子是一个受葡萄糖调节的启动子,最适作用温度为37℃。以P43启动子为基础通过饱和突变构建启动子突变文库。优化确定聚合酶环形延伸克隆(CPEC)最适的退火温度为61.6℃,最佳的PCR循环数为25个。以LacZ作为报告基因通过CPEC克隆构建启动子突变文库,以β-半乳糖苷酶的酶活表征启动子的强度,筛选得到11个正向突变株,其中标号为“7”的突变株β-半乳糖苷酶酶活为P43启动子控制下的167.7%。对采用同源重组法在ZJU-2011中进行基因敲除的可行性进行研究。确定解淀粉芽孢杆菌ZJU-2011的最适转化条件为甘氨酸添加量为1%,菌体OD600为0.9左右,质粒进行去甲基化处理,电场强度为21KV/cm,电阻为200Ω。构建以mazF毒蛋白为反筛标记的整合载体pIEFMLN,通过同源重组成功筛选到了单交换阳性转化子,但经实验验证双交换重组的概率低于1/1500,因此初步判断同源重组法不适用于解淀粉芽孢杆菌ZJU-2011的基因敲除。尝试构建解淀粉芽孢杆菌中的CRISPR-Cas基因编辑系统。成功构建CRISPR-Cas9相关的敲除载体pHYpCasMLN,经验证该质粒已成功转入ZJU-2011 中。