荷正电聚合物为探针共振光散射光谱法检测生物大分子

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自从1993年Pastemack等人利用普通的荧光分光光度计建立共振光散射技术以来,共振光散射技术现得到了广泛的运用,已分析科学领域的重要一部分。蛋白质和核酸都是重要的生物大分子,是生命体的主要基本物质,在生命活动中扮演着重要角色。因此对它们进行测定是分析工作者的重要内容。本文选用了一线性阳离子高分子聚合物,聚(4-乙烯基-N-乙基)吡啶季铵盐作为探针,利用共振光散射光谱法分别建立了测定蛋白质和DNA的新方法,并将该探针用于杂交检测中。主要研究内容如下:1.研究了聚合物与蛋白质的相互作用,优化出最佳反应条件,通过计算得到了蛋白质与聚合物的结合比、结合常数等数据,建立了一种测定蛋白质的新方法。在pH值为7.54的B-R缓冲介质中,体系在470nm处产生最大的共振光散射信号,在最佳实验条件下反应体系增加的RLS值与BSA和HSA分别在3.5×10-9-2.1×10-7。M和3.3×10-9-1.7×10-7M范同内成线性,检出限分别为1.2×10-9 M和1.2×10-9 M。并利用此方法对蛋白合成样进行了测定,测定结果令人满意。2.研究了聚合物与小牛胸腺DNA的相互作用,优化出最佳反应条件,通过计算得到了DNA与聚合物的结合比、结合常数等数据,建立了一种测定DNA的新方法。在pH值为7.0的PBS缓冲、离子强度为0.0300M的介质中,体系在344.8nm处产生最人的共振光散射信号,在反应的最佳条件下反应体系增加的RLS与小牛胸腺DNA的浓度在0.0900至2.70μg/mL范围内成线性,检出限为17ng/mL。3.将聚合物用于DNA杂交的检测当中,基于聚合物与单链DNA和双链DNA反应前后RLS信号的不同,实现了完全互补序列与单碱基错配序列及非互补碱基序列的区分,建立了一种简单、快速、免标记的DNA杂交检测方法。在pH值为7.0,离子强度为0.030M的PBS缓冲介质中,在470nm处产生最大的共振光散射信号,在最佳条件下,靶物DNA在5.0-500nM的浓度范围内线性良好,检测限约为2nM。
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