冠心病患者血浆miRNA的表达特点

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:buyaowenwo123456
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目的:建立动脉粥样硬化血浆microRNA(miRNA)的表达谱,探讨miRNA在动脉粥样硬化性心脏病患者循环血浆中的表达特点及候选miRNA的初步调控机制,为进一步研究miRNA在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制奠定基础,同时将在动脉粥样硬化的预防和治疗中,针对可供选择的目标miRNA进行干预治疗。  方法:选用载脂蛋白E基因敲除小鼠(ApoE-/-)喂养8个月制备动脉粥样硬化模型,分别选取各10例ApoE-/-小鼠和10例正常对照组小鼠血浆为样本,利用高通量基因芯片技术分析差异表达的miRNA,其结果与前期工作ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化组织芯片分析结果取交集,筛选出两者中共同差异表达的miRNA作为循环血液中的候选miRNA(miR-34a、-21、-23a、-30a、-106b),用实时定量PCR法验证小鼠(各组6例)候选miRNA的芯片分析结果。在临床平台上用实时定量PCR法检测动脉粥样硬化性心脏病患者(32例)以及健康对照组(20例)血浆中候选miRNA的表达情况、进一步运用生物信息学分析预测miRNA的靶基因,用蛋白印迹(western blot)法检测目的靶基因(HSP90)的表达,来初步探讨miRNA调控基因的靶向关系。  结果:高通量基因芯片分析ApoE基因敲除小鼠血浆与对照组相比较14种miRNA有显著差异表达,其中6种显著上调(3.02-3.46倍),8种显著下调(3.02-4.21倍);动脉粥样硬化组织和血浆芯片分析结果取交集,共同显著差异表达的miRNA有5种:miR-34a、-21、-23a、-30a、-106b;动脉粥样硬化性心脏病患者与健康对照组血浆miRNA表达相比较miRNA-34a和miRNA-21显著上调p<0.01、miRNA-23a显著下调p<0.001;针对其中的miRNA-23a,我们进一步用生物信息学分析预测靶基因,结果miR-23a和HSP90调控关系对引起了我们的关注,通过蛋白印迹试验检测结果,在动脉粥样硬化组织中预测靶基因HSP90表达显著升高(p<0.05)。  结论:在动脉粥样硬化小鼠模型血浆中有显著差异表达的14种miRNA,这些miRNA可能参与动脉粥样硬化发生发展的病理生理过程;循环血浆中的3种miRNA即miRNA-23a、miR-21、miR-34a的表达量具有冠心病患者生物标记的潜能;miRNA-23a可能是通过调控其靶基因HSP90的表达来影响动脉粥样硬化疾病的发生发展过程。
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