【摘 要】
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猕猴桃果实营养价值较高,富含多种维生素、矿物质和抗氧化物质,但由于猕猴桃皮薄多汁,在常温下贮藏极易软化腐烂变质,在很大程度上限制了猕猴桃产业的发展。为研究猕猴桃果实采后腐败机制和生物保鲜,探讨引起猕猴桃贮藏期间导致腐烂的腐败菌种类和致腐能力。本研究采用传统分离培养法和高通量测序相结合的方法分析猕猴桃贮藏期间腐败菌群的组成和变化特征,确定优势腐败菌,同时对分离的腐败菌进行致腐能力分析和芽孢杆菌对其抑
【基金项目】
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黑龙江省省属本科高校基本科研业务费科研项目（2018-KYYWF-0954）
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猕猴桃果实营养价值较高,富含多种维生素、矿物质和抗氧化物质,但由于猕猴桃皮薄多汁,在常温下贮藏极易软化腐烂变质,在很大程度上限制了猕猴桃产业的发展。为研究猕猴桃果实采后腐败机制和生物保鲜,探讨引起猕猴桃贮藏期间导致腐烂的腐败菌种类和致腐能力。本研究采用传统分离培养法和高通量测序相结合的方法分析猕猴桃贮藏期间腐败菌群的组成和变化特征,确定优势腐败菌,同时对分离的腐败菌进行致腐能力分析和芽孢杆菌对其抑菌活性分析。主要获得以下结果:1.通过测定猕猴桃不同贮藏期间主要理化指标的基础上,利用高通量测序技术对猕猴桃7个贮藏阶段的腐败真菌群落变化进行研究。结果显示随着贮藏时间延长,果实p H值从3.70下降到3.31,可溶性固形物（Total Soluble Solids,TSS）含量升高了5.02%,失重率达到58.60%。对7个阶段35个样本进行真菌内转录间隔区（Internal Transcribed Spacer,ITS）测序,ITS测序结果共获得了2801967条高质量真菌序列,随着贮藏时间增长,果实逐渐腐烂,群落丰富度逐渐降低。子囊菌门（Ascomycota）为优势真菌门,占序列总数的89.6%,优势真菌属为新壳梭孢属（Neofusicoccum）、葡萄座腔菌属（Botryosphaeria）和间座壳属（Diaporthe）。2.猕猴桃贮藏期间主要理化指标与真菌群落组成相关性分析,结果显示:随贮藏时间增长,果实内菌群丰富度逐渐降低,多样性、均匀度和覆盖度较稳定,失重率与腐败真菌Chao1、Observed species、Simpson、Shannon和Pielou’s evenness指数呈显著负相关,TSS含量与Chao1、Observed species和Simpson指数呈显著负相关,p H值与Chao1、Observed species、Simpson、Shannon和Pielou’s evenness指数呈显著正相关。失重率和TSS含量与优势真菌属新壳梭孢菌属呈显著正相关,相关系数分别是0.897（P＜0.01）、0.800（P＜0.05）,果实主要指标与其它真菌不具有相关性。3.采用培养法分离猕猴桃贮藏期间腐败果实组织的腐败菌,最终获得15株真菌和16株细菌,经回接实验致腐能力分析,具有致腐性的真菌有10株,细菌有4株。经形态学和分子生物学鉴定得知,致腐真菌中Z-1为轮状镰刀菌（Fusarium verticillioides）,Z-2为间座壳菌属（Diaporthe cf.nobilis）,Z-3为间座壳菌属（Diaporthe sp.）,Z-4、Z-5、Z-9同为葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）,Z-6为间座壳菌属（Diaporthe vaccinii）,Z-7为果生炭疽菌（Colletotrichum fructicola）,Z-11为间座壳菌属（Diaporthe melastomatis）,X-13为长帕瓦链霉菌（Streptomyces champavatii）。致腐细菌中X-1为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,X-4为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）,X-5为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,X-10为类芽孢杆菌属（Priestia aryabhattai）。4.选取三种芽孢杆菌（巨大芽孢杆菌YB-1、短小芽孢杆菌YB-2和枯草芽孢杆菌YB-3）和壳聚糖对分离的腐败菌进行抑菌活性实验,结果表明:三种芽孢杆菌菌液对14株致腐菌均具有抑菌作用,混合菌液（YB-1-2、YB-1-3、YB-2-3、YB-1-2-3,每种菌液等比例混合）抑菌效果更好,室温条件下用YB-1-2混合菌液对猕猴桃进行喷施处理的保鲜效果最佳,与对照组相比对猕猴桃的相对防治效果达48%。本研究采用分离培养法和高通量测序法相结合分析鉴定了猕猴桃贮藏过程中的优势腐败菌群,同时采用芽孢杆菌和壳聚糖分析对腐败菌的抑菌活性,从而为研究猕猴桃腐烂机制和生物保鲜提供理论依据。
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