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目的:了解贵州省2009年常见临床分离菌株的耐药性及铜绿假单胞和肠球菌相关耐药基因的存在状况。 方法:采用纸片扩散法（K-B法）及琼脂稀释法进行药敏试验，以美国临床实验室标准委员会(CLSI)2009年版为判断标准，药敏结果使用WHO提供的WHONET5.4软件进行统计分析。运用聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌的44种耐药基因和肠球菌的12种耐药基因，对阳性基因进行测序，测序结果进行Blast分析。 结果:收集2009年贵州省6家医院非重复临床分离株共2355株，其中革兰阴性杆菌检出率为72.5％(1708/2355)，革兰阳性球菌为27.5％(647/2355)。产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和克雷伯菌检出率分别为64.4％和37.2％;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检出率分别为69.5％和68.1％。大肠埃希菌和克雷伯菌属中产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率比非产ESBLs菌株高;肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物高度敏感，耐药率小于5％;其次为头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦和阿米卡星，耐药率均小于30％。铜绿假单菌和不动杆菌对美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为17.6％、34.5％和15.2％、18.0％。对铜绿假单胞菌抗菌活性最高的药物为多粘菌素B，头孢哌酮/舒巴坦对铜绿假单胞菌和不动杆菌属细菌亦显示出较高的抗菌活性，耐药率分别为12.5％和8.1％。 MRSA和MRCNS对β-内酰胺类抗生素和其它多数抗菌药物的耐药率较甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSCNS)高，未发现耐糖肽类抗生素和利奈唑胺的葡萄球菌。屎肠球菌对抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌，两者的耐高水平庆大霉素(HLGR)的检出率分别为60.0％和69.2％，未检出糖肽类抗生素和利奈唑胺耐药的肠球菌。耐药基因的检测结果显示，20株铜绿假单胞菌中检出qacE△1、merA、aac(6)-Ⅰb、aac(6）-Ⅱ、ant（3"）-Ⅰ、rmtB、TEM帮CRAB8种基因，阳性率分别为10％(2/20)、5％(1/20)、10％(2/20)、10％(2/20)、10％(2/20)、5％(1/20)、10％(2/20)和10％(2/20)，膜孔蛋白编码基因oprD2缺失率为100％(20/20)。21株肠球菌中检出aac(6)/aph(2")、aph(3)-Ⅲ、ant(6-Ⅰ、ermB和tetM5种基因，阳性率分别为90.5％(19/21)、52.4％(11/21)、52.4％(11/21)、90.5％(19/21)和47.6％(10/21)。 结论:1、2009年本地区常见的临床分离细菌为革兰阴性杆菌;产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌呈现出多重耐药;耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)对大环内酯类药物和复方新诺明的耐药性较为严重;碳青霉烯类药物对于肠杆菌科细菌、糖肽类抗生素和利奈唑胺对革兰阳性球菌均显示出高度抗菌活性。2、膜孔道蛋白编码基因oprD2的缺失是本地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制，携带氨基糖苷类修饰酶基因和红霉素甲基化酶基因是肠球菌对氨基糖苷类药物和红霉素耐药的主要原因。