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背景: 心脏移植已成为当今治疗终末期心脏病的重要手段,经过学者及心脏外科医师的不懈努力,供心移植成功率及患者术后存活率都有了很大提升。但是供心在移植过程中不可避免的会经历心肌缺血及再灌注损伤,出现心肌收缩功能障碍、再灌注性心律失常、心肌细胞膜通透性改变等,进而影响供心移植效果,因此,寻找合理有效的供心保护方法具有重要的临床意义。 目前供心保护方法的研究主要集中在两方面:增强供心对缺血缺氧的耐受和降低供心缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)。心脏保护液、顺灌逆灌技术(交叉进行顺灌和逆灌)及渐灌注技术能增强心肌对缺血缺氧的耐受力,起到供心保护作用,并已应用于临床。在如何降低心肌缺血再灌注损伤方面目前的研究主要有:缺血预处理(Ischemic preconditioning,IPC)、缺血后处理(Ische mic postconditioning,IPOC)、远端缺血预处理(Remote ischemic preconditionin g,RIPC)、远端缺血后处理(Remote ischemic post conditioning,RIPOC)、药物预处理(pharmacological preconditioning,PPC)、药物后处理(pharmacologic al postconditioning,PPOC)等。 2005年,Faraz等人研究发现,在大鼠心肌缺血发生后恢复灌注前,给予短暂的肾动脉缺血/再灌注循环,能够减轻心肌缺血再灌注损伤,故在缺血后处理的基础上进一步提出远端缺血后处理(Remote ischemic postconditioning,RIPOC)概念。此后,在脑、肝、肾、骨骼肌、血管等器官组织研究进一步证实远端缺血后处理可以减少器官的缺血后再灌注损伤。因RIPOC可控性强,并且在非缺血器官或组织操作,故其成为研究供心缺血再灌注损伤方面的热点。2011年宋俊贤等通过研究远距缺血后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤作用时发现,下肢远端缺血后处理后会刺激感觉神经TRPV1受体,产生降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)等神经递质,故考虑这些神经递质通过循环系统到达心脏发挥心肌保护作用,但这一神经反射途径的保护机制尚缺实验依据,特别是对移植供心是否同样有此保护作用未见报道。 本课题拟对RIPOC在心脏移植中的供心保护作用及其神经反射途径(感觉神经TRPV1受体---CGRP、SP途径)作用机制进行研究。 目的: 探讨远端缺血后处理在心脏移植中对供心的保护作用,明确神经反射途径是否参与了这一保护作用。 方法: 36只健康成年新西兰大白兔,雌雄不拘,体重2.0~3.0kg(广州医科大学实验动物中心提供)。随机分为3组,每组供体受体各6只。 对照组:供体家兔固定于兔台上,腹腔注射苯巴比妥钠50mg/kg,颈部局麻切开,显露气管,“T”型切开,气管导管(3.5#)插管,接小动物呼吸机。正中切开,剪开心包,显露心脏,经右房全身肝素化(400U/kg),游离主动脉、主肺动脉,主动脉根部过带阻断并60mmhg重力灌注改良stanford停搏液15ml/kg(4。C),灌注完毕后迅速将心肺组织一并取下,置于改良stanford停搏液(4。C)中修剪,保留心脏主动脉、肺动脉并保存2小时。受体家兔固定于兔台上,腹腔注射苯巴比妥钠50mg/kg诱导麻醉,耳缘静脉建立静脉通道。触摸股动脉搏动点,腹股沟部局麻后纵行切开,游离股动静脉干,耳缘静脉行全身肝素化(400U/kg),湿纱块覆盖备用。取出供心,行Ono’s同种异位心脏移植术,复跳2小时后取下供心结束实验。 RIPOC组:供心摘取到移植同对照组,移植完毕后供心再灌注同时非移植侧股动脉实施3个周期的夹闭10min/开放5min,共计45min。 辣椒素+RIPOC组:受体家兔于实验前5天每天使用辣椒素(100mg/kg)5ml分2次颈部皮下注射。每次一半,每天2次,余同RIPOC组。 检测指标:测定不同时点心脏心肌酶指标,实验结束后取心尖部标本测定心肌组织含水量,测定心肌凋亡指数,观察光镜、电镜下心肌细胞结构改变。 结果: 1.心肌酶:三组移植前各项基础心肌酶指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复跳后30min、60min、90min和120min三组均显著升高,120min时RIPOC组升高幅度明显低于对照组和辣椒素+RIPOC组,组间差异有统计学意义(P<0.01);辣椒素+RIPOC组升高幅度低于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。 2.心肌含水量:RIPOC组心肌含水量(70.3±1.6%)明显低于辣椒素+RIPOC组(78.4±1.1%)和对照组(80.3±0.9%),组间差异有统计学意义(P<0.01)。辣椒素+RIPOC组心肌含水量(78.4±1.1%)低于对照组(80.3±0.9%),差异无统计学意义(P>0.05)。 3.心肌细胞凋亡指数:RIPOC组心肌细胞凋亡指数(7.2±0.7%)明显低于辣椒素+RIPOC组(19.4±1.5%)和对照组(21.6±1.4%),组间差异有统计学意义(P<0.01)。辣椒素+RIPOC组心肌细胞凋亡指数(19.4±1.5%)低于对照组(21.6±1.4%),差异无统计学意义(P>0.05)。 4.光镜下观察:RIPOC组:心肌细胞结构清楚,排列规则有序,心肌纤维间隙存在且丰富,着色良好,细胞核呈蓝色,大小形态基本正常,胞浆呈淡红色且形态饱满;辣椒素+RIPOC组:心肌细胞结构欠清晰,心肌细胞稍肥大,肌间质水肿,间隙扩大,肌原纤维淡染消失,部分细胞胞核溶解、消失和固缩,心肌细胞变性伴不同程度的坏死;对照组:心肌细胞结构消失,排列紊乱,细胞间隙增大,胞浆溶解呈空泡气球样变或网状改变,细胞核溶解、消失和固缩,细胞界限模糊。 5.电镜下观察:RIPOC组:心肌细胞核呈梭形、椭圆形、长杆状,核膜清晰常染色体呈细颗粒状,异染色体分布在核膜内侧,肌纤维排列有序,闰盘、Z带清晰可见,肌原纤维间有杆状线粒体,有丰富糖原颗粒。线粒体均匀排列,可见清晰的线粒体脊和膜,两侧肌浆网可见L小管;辣椒素+RIPOC组:细胞核呈不规则形,核膜清晰,肌纤维排列正常,闰盘、Z带欠清晰,线粒体轻度肿胀,部分嵴溶解,糖原颗粒减少;对照组:细胞核呈不规则形,闰盘、Z带欠清晰,线粒体肿胀,嵴溶解,糖原颗粒显著减少。 结论: 1.远端缺血后处理在心脏移植中对供心有保护作用; 2.神经途径参与远端缺血后处理对供心的保护机制; 3.改良One’s模型同种异位心脏移植术成功率高,简单易行。