论文部分内容阅读
目的:随着腰椎手术的广泛开展,腰椎手术失败综合征(failed back surgery syndrome,FBSS)发生率显著增高,严重影响了患者的生活质量。腰椎手术失败综合征是腰椎后路手术常见的并发症,硬膜外纤维化是其主要的原因,目前对其并没有良好的治疗效果。在本研究中,我们构建了壳聚糖(CS)/聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)-介孔生物玻璃(MBG)双层功能膜,负载曲尼斯特(tranilast,TNL),希望在兔椎板切除模型中重建椎板并减轻硬膜外纤维化,达到预防腰椎手术失败综合征的效果。方法:1.运用超临界二氧化碳发泡法和冷冻干燥法制备CS/PLGA-MBG双层功能膜并于CS层负载曲尼斯特,PLGA-MBG层负载BMP-2。2.检测CS/PLGA-MBG功能膜的结构及负载药物后的释放情况。3.制备兔椎板切除模型,将功能膜置入椎板切除部位后饲养4周,12周,取材后行micro-CT检测及切片苏木精-伊红染色,马松染色及番红固绿染色,观察椎板切除位置骨形成情况及硬膜外纤维化情况。4.在体外采用CCK8法和Western Blot法观察曲尼斯特对小鼠成纤维细胞(L929)增殖及纤维化作用的调控作用,采用ALP染色及成骨相关基因表达检测等方法观察曲尼斯特对小鼠间充质干细胞成骨分化的调控作用。结果:1.制备的CS/PLGA-MBG功能膜具有规律的孔结构,且两层膜孔结构不同。2.CS/PLGA-MBG功能膜可分别负载曲尼斯特和BMP-2,且可在体外持续释放较长时间。3.成功制备兔椎板切除模型,置入CS/PLGA-MBG功能膜12周后可在椎板切除区域观察到明显的新生骨,同时纤维组织数量明显减少,且未进入椎管内,与对照组有显著差异。4.曲尼斯特在体外通过抑制p65基因入核在小鼠成纤维细胞中抑制纤维化并在CS/PLGA-MBG功能膜上抑制小鼠间充质干细胞成骨分化。结论:载曲尼斯特/BMP-2的CS/PLGA-MBG双层功能膜可在体外实验中抑制成纤维细胞纤维化,并在体内实验中重建椎板,减轻术后纤维化,有望成为预防腰椎手术失败综合征的方法。