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朱砂根（Ardisia crenata Sims）为中国药典77年版收载的紫金牛属2种药用植物之一，自明代《本草纲目》记载该植物药用以来，已有近500年的历史。该植物有着明显的生理活性和药用功效，具有很高的开发价值。本文研究了朱砂根组织培养快繁技术、朱砂根皂苷的分离纯化条件、含量测定方法和结构鉴定。研究结果如下：通过对朱砂根组织培养技术的研究，得到以下结论：1．朱砂根组织培养的最佳取材时间为3月～7月，污染率在10％左右。升汞连续两次消毒（4+4）min是朱砂根茎段消毒的适宜时间，而叶片消毒的适宜时间为（3+3）min。此时污染率和褐化率均可控制在10％左右。2．腋芽增殖快繁育苗技术：1)腋芽诱导培养：以朱砂根带芽茎段为外植体，初代培养腋芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg／L+NAA 0.1mg／L，启动率为97.53％。2)腋芽增殖培养：适合朱砂根腋芽增殖的最佳培养基配方为MS+6-BA 2.0mg／L+NAA 0.1mg／L+KT 0.5mg／L，60d后增殖系数在3.0以上。3)生根培养：生根阶段以1／2MS+IBA0.2mg／L的培养基最佳，生根率达90％以上。添加0.2％的活性炭可明显促进根的生长，提高生根率、生根数。4)炼苗与移栽：最有利于朱砂根无菌苗移栽存活的基质类型为河沙：珍珠岩：蛭石=1：1：1，或蛭石：珍珠岩=1：1，成活率在80％以上。3．器官发生再生植株育苗技术1)愈伤组织诱导：茎段是朱砂根愈伤组织诱导的最适外植体，MS+2，4-D2.0mg／L+NAA 0.5mg／L+6-BA 0.2mg／L是愈伤组织诱导的最适培养基，诱导率在90％以上。2)愈伤组织的类型：诱导出的愈伤组织有两种类型，第一种湿润、疏松，乳白色或淡黄色。第二种干燥、致密，白色、淡红色或青绿色。疏松型愈伤组织可用于细胞培养，致密型愈伤组织可用于分化培养。3)愈伤组织增殖培养：疏松型愈伤组织为最适外植体，其增殖的最适培养基配方组合为：MS+6-BA 0.2mg／L+NAA 0.2mg／L+2，4-D 0.5mg／L。30d后增殖率在300％以上。4)愈伤组织分化培养：致密型愈伤组织为最适外植体，在培养基MS+6-BA1.0mg／L+NAA 0.1mg／L上可分化出芽和根，但不定芽没有萌发。5)光照条件的影响：光照对增殖培养与分化培养均有利。通过对朱砂根皂苷分离纯化条件、含量测定方法和结构鉴定的研究，得到以下结论：1．建立了朱砂根皂苷浸膏提取工艺。结果表明，采用甲醇水溶液为提取溶剂的浸膏提取工艺为：温度70℃，甲醇浓度80％，分别用8倍、6倍、4倍甲醇回流提取3次，时间分别为3，2和1h，减压浓缩，水沉离心，AB-8大孔树脂柱层析，80％甲醇洗脱，70℃以下真空烘干，得粗提物浸膏，收率5％。2．首次报道了朱砂根皂苷标准品制备技术。在浸膏提取工艺基础上，取粗提物浸膏，硅胶柱层析，二氯甲烷-乙醇-乙酸乙酯（4∶1.5∶1，V／V／V）洗脱，TLC检验，收集合格段，70℃减压浓缩干，乙醇重结晶，得标准品，朱砂根皂苷含量达98.58％。3．建立了TLC法分析条件：采用硅胶GF254板，二氯甲烷-乙醇-乙酸乙酯（4∶2∶1，V／V／V）为展开剂，10％硫酸乙醇溶液显色，100℃下烘干。该条件下TLC图谱清晰，斑点明显且分离较好，Rf值约0.6，重现性好。4．建立了RP-HPLC法分析条件：色谱柱为SHIM-PACK VP-ODS C18（150mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-水（37∶63，V／V），流速1.0mL／min，检测波长205nm，柱温40℃，灵敏度0.16AUFS。该色谱条件下朱砂根皂苷峰形良好，保留时间约12.2min。方法的平均加标回收率94.14～99.38％，相对标准偏差（RSD）为0.48～1.97％（n=3）。该方法具有较高的回收率，稳定性、精密度和重复性良好，结果可靠。采用此法可对朱砂根皂苷含量进行准确的测定。5．对朱砂根野生植株及组织培养物中的皂苷含量进行了测定。结果表明：朱砂根野生植株中根的皂苷含量最高，是朱砂根提取皂苷的最佳部位。组培苗中，根内皂苷含量最高，是天然植株根中含量的54.62％。组培所得茎段愈伤组织中，疏松型愈伤组织皂苷含量较高，可达天然植株茎中的皂苷含量水平。6．采用质谱和核磁共振分析确定朱砂根皂苷分子量为1074，分子式C53H86O22，结构为西克拉敏A-3-O-[α-L-吡喃鼠李糖（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖（1→4）][β-D-吡喃葡萄糖（1→2）]α-L-阿拉伯糖。