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目的流行性乙型脑炎(简称乙脑)是一种由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染引起的中枢神经系统疾病,会导致严重的中枢神经系统炎症。Micrornas(miRNAs)是一类长度约为20~24nt的内源性非编码小RNA分子,通过与靶基因的互补结合促使靶基因分解或抑制靶基因表达,在基因表达网络中具有十分重要的转录后调控作用。本次研究以miRNA为切入点,通过研究JEV感染后小鼠原代神经元细胞miRNA的表达谱,初步探讨JEV与宿主在miRNA水平上的相互作用,为进一步研究乙脑病毒致神经功能异常机制提供方向和理论支持。方法1、选择出生24h内的乳鼠进行原代脑神经元体外培养,检测神经元细胞的培养状态;2、JEV(NJ2008株)接种小鼠原代脑神经元细胞,空斑实验检测不同时间病毒滴度,收集病毒滴度最高时间相染毒组和对照组细胞样品进行高通量测序,通过数据分析筛选出差异表达显著的miRNA,同时运用实时定量PCR验证差异表达的miRNA,确定JEV感染后小鼠原代神经元细胞miRNA表达谱的变化情况;3、选取其中表达差异显著的miRNA,转染相应miRNA模拟物使其对应的miRNA过表达,运用实时定量PCR检测JEV-E基因的表达,初步分析目标miRNA功能。结果1、神经元细胞中微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫荧光染色表明乳小鼠大脑皮层神经元细胞体外培养体系建立,可以作为JEV感染的靶细胞;2、空斑实验结果显示接种48h后JEV的滴度水平最高,选择该时间相进行高通量测序。结果显示染毒组和对照组的样品中已知miRNA的数量分别为1348和1297个,通过生物信息学分析,筛选出26个差异表达显著的miRNA,其中18个miRNA表达上调,8个miRNA表达下调。经实时定量PCR验证,26个miRNA的表达谱和高通量测序结果基本一致;3、JEV-E基因的实时定量PCR结果显示在JEV感染48h后,小鼠原代脑神经元细胞中mmu-miR-21a-3p、mmu-miR-223-5p、mmu-miR-147-3p、mmu-miR-155-5p和mmu-miR-146a-5p的表达会促进JEV-E基因在神经元细胞中表达,而mmu-miR-301a的表达则抑制JEV-E基因的表达。结论本次研究在细胞水平上研究了JEV(NJ2008株)感染后小鼠原代脑神经元细胞的miRNA表达谱变化情况,运用高通量测序技术分析及实时定量PCR验证,筛选出JEV接种后26个差异表达显著的miRNA,并初步探究了这些表达差异显著miRNA的功能,证实神经元细胞中miRNA的表达会影响JEV的复制,为进一步研究JEV致神经功能异常机制提供研究方向和理论支持。