矮牵牛作为第一个被广泛应用的花坛植物,其研究的方向已经拓展到多个领域,成为了重要的模式植物。启动子作为基因调控水平最重要的环节,对植物的生长发育及对外界环境的响应起到十分重要的作用,因此,越来越多的精力投入到了启动子克隆及功能研究上。寻找花药/花粉特异性启动子,通过抑制和破坏这些特异性基因,可能导致雄性不育,为基因工程手段创造雄性不育提供依据。转录因子是一类对基因的表达起到抑制或增强作用的蛋白质,功能十分关键。本研究在课题组前期获得了pPhGRP全长的情况下构建了 5’端缺失连接GUS报告基因的表达载体,通过同源转化矮牵牛和异源转化拟南芥来判断启动子上的关键作用区段;此外,对前期在cDNA文库中筛选得到的候选转录因子进行酵母单杂交点对点验证,进一步研究pPhGRP的调控网络。1.PhGRP启动子5’端缺失表达载体的构建及遗传转化。成功构建3个PhGGP启动子5’端缺失片段融合GUS报告基因的载体pPhGRP-690::GUS、pPhGRP-509::GUS、pPhGRP-206::GU并转化矮牵牛和拟南芥,分别得到7、7、11株转基因阳性矮牵牛和8、11、16株转基因阳性拟南芥,pPhGRP-1220::GUS转化获得了20株阳性矮牵牛和6株阳性拟南芥。GUS组织化学染色结果显示pPhGRP起始密码子上游的-1220bp至-690bp是调控该启动子在花药中特异性表达的关键区段,该区段包含一个核心的花粉/花药特异性元件GTGA。2.酵母单杂交实验结果表明pPhGRP在体外确实与PhMYC2和PhY10这两个转录因子存在互作关系。