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目的:
研究仔鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)颅内感染对海马局部Ca2+与蛋白激酶C(PKC)表达水平的影响。
方法:
体外细胞培养法制备MCMV Smith株,细胞病变法(CPE)测定病毒致半数细胞感染量(TCID50)。ELISA法筛选MCMV IgM、IgG均阴性的BABL/C小鼠,雌雄小鼠交配受孕,待分娩后随机选择乳鼠分为病毒组和对照组,于生后24小时内分别颅内注射病毒悬液10微升和等量无菌生理盐水。观察各组幼鼠的生存发育情况,待14d后各取两组10只仔鼠,无菌采集仔鼠脑组织,采用PCR法检测有无MCMV感染。
其余仔鼠待其70d后无菌采集海马组织,应用免疫组化技术及荧光分光光度计法分别检测PKC蛋白及Ca2+浓度的表达,并用光学显微镜观察海马组织的病理学改变。
结果:
1.病毒组和对照组仔鼠脑组织感染率分别为90[%]及0[%],x2=16.36,P<0.05;病毒组与对照组成活率分别为28.17[%]及100[%],x2=0.003,P<0.05。
2.病毒组和对照组海马神经元细胞内的Ca2+浓度分别为221.48±21.36及118.75±40.85,t=10.957,P<0.05。
3.病毒组和对照组蛋白质表达水平分别为0.12±0.02及0.14±0.03,t=2.766,P<0.05。
4.海马病理学组织切片可见病毒组神经细胞表达明显减少、排列紊乱,细胞形态不一,部分细胞核固缩、浓染。
结论:
1.仔鼠颅内注射MCMV可导致颅内感染,并使其存活率降低。
2.仔鼠颅内感染MCMV可导致海马PKC蛋白表达量及钙离子浓度异常改变,并出现神经元数目减少等病理改变。这可能是MCMV感染致仔鼠学习记忆能力下降的重要机制之一。