拟南芥AtPRGL基因表达模式及功能的初步研究

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AtPRGL(At5g14920)基因是拟南芥一个同时含有PRP和GASA两个功能域的未知功能的基因,以生态型Col的拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生型及其T-DNA插入突变体Salk 054982、Salk 069495、Salk 112197为材料,本论文初步研究了该基因表达模式及功能。具体结果如下: 1.通过在T-DNA片段的左边界及插入基因位点上游、下游设计引物进行PCR特异片段扩增,以及50 mg/L的Kan抗性筛选,鉴定并获得了Salk 054982、Salk 069495、Salk 112197纯合株系,为研究提供了突变体实验材料。通过构建AtMPRGL过量表达载体转化野生型拟南芥植株,获得潮霉素抗性植株,经过半定量RT-PCR鉴定,初步确定为转基因植株,为以后研究该基因的功能奠定了基础。 2.对突变体表型分析表明,在MS培养基上野生型与突变体无明显差异。但在含有5 pan PAC的MS培养基上萌发时,野生型的萌发率高于突变体。而且含有5μm PAC的培养基尚未萌发的野生型与突变体种子重新置于MS、MS+PAC(5μM)、MS+GA (10μM)上继续培养时,野生型种子萌发的恢复率均比突变体高。 3.提取LD条件培养的Col不同组织总RNA进行半定量RT-PCR,结果表明AtPRGL在花序茎、莲座叶、茎生叶、花序和根等均有不同水平的表达,且在莲座叶中表达较高,根中较低。克隆得到AtPRGL的启动子序列,构建AtPRGL::GUS载体,转化野生型拟南芥植株。GUS组织化学染色结果揭示AtPRGL在植物的根尖、侧根、下胚轴、莲座叶及茎生叶的叶脉、花序茎、花丝、花柱及果荚等均有表达。当外施GA时,GUS转基因植株幼苗与对照相比其子叶和下胚轴的染色均加深,而外施PAC时,GUS转基因植株染色与对照相比均变浅。另外,花序茎受到伤害处会立即出现染色,而莲座叶和茎生叶伤害部位没有出现染色。 4.克隆得到AtPRGL的cDNA序列插入到EGFP基因之前,构建AtPRGL::GFP亚细胞定位的载体。转化野生型拟南芥植株,获得抗性植株,经过PCR检测为转基因植株,为AtPRGL的亚细胞定位提供了材料。
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