【摘 要】
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目的:Ski作为一种原癌基因,在几乎所有组织中都有表达。有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号传导是调节细胞增殖、分化、凋亡及炎症的主要途径,ERK1/2为MAPK成员,同样参与细胞增殖、分化等。脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）引起的星形胶质细胞活化并且反应性增生,是胶质瘢痕形成的重要过程,影响SCI后神经功能恢复。课题组前期实验证明脊髓损伤后星形胶质细胞中Ski基因表达
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目的:Ski作为一种原癌基因,在几乎所有组织中都有表达。有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号传导是调节细胞增殖、分化、凋亡及炎症的主要途径,ERK1/2为MAPK成员,同样参与细胞增殖、分化等。脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）引起的星形胶质细胞活化并且反应性增生,是胶质瘢痕形成的重要过程,影响SCI后神经功能恢复。课题组前期实验证明脊髓损伤后星形胶质细胞中Ski基因表达上调,并与星形胶质细胞增殖相关。本项研究主要探讨Ski调控下游信号分子MAPK/ERK1/2,进而调控星形胶质细胞增殖。方法:大鼠星形胶质细胞的提取、纯化及培养,使用LPS刺激大鼠星形胶质细胞建立星形胶质细胞活化模型。（1）将星形胶质细胞随机分为:对照组、LPS活化组。检测各组星形胶质细胞Ski蛋白、星形胶质细胞特异性蛋白GFAP表达变化及星形胶质细胞增殖情况（PCNA、CDK4、Cyclin D1的表达变化）。（2）检测对照组、LPS活化组ERK1/2通路蛋白的表达变化,并且使用ERK1/2通路特异性抑制剂U0126干预星形胶质细胞,验证MAPK/ERK1/2通路与星形胶质细胞增殖关系。（3）使用慢病毒敲减Ski基因,验证Ski基因与星形胶质细胞增殖的关系。（4）检测慢病毒敲减Ski基因后MAPK/ERK1/2通路蛋白的表达变化,验证Ski与该通路的关系。结果:通过RT-PCR和Western Blotting实验发现LPS刺激大鼠星形胶质细胞后Ski及GFAP m RNA和蛋白表达上调,PCNA、CDK4、Cyclin D1蛋白及m RNA表达上调,星形胶质细胞增殖加快,并且MAPK/ERK1/2通路激活;使用ERK1/2抑制剂U0126干预星形胶质细胞后,星形胶质细胞增殖受到抑制,表明ERK1/2影响星形胶质细胞增殖。使用慢病毒敲减Ski基因后,Ski蛋白表达降低,星形胶质细胞增殖抑制,表明Ski可调控星形胶质细胞增殖;同时,ERK1/2磷酸化受到抑制,表明Ski可通过ERK1/2通路发挥增殖调控作用。结论:该项研究证实了Ski通过MAPK/ERK1/2信号通路进而调控星形胶质细胞增殖,影响胶质瘢痕形成。有望成为脊髓损伤治疗的新思路。
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