副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum，Hpg)是巴斯德氏菌科，嗜血杆菌的成员，能引起鸡的传染性鼻炎。鸡传染性鼻炎是一种急性上呼吸道传染病，本病发生后可引起蛋鸡产蛋量下降和育成鸡生长发育受阻，造成很大的经济损失。 副鸡嗜血杆菌在实验室分离培养困难，生长条件苛刻，需要高营养成分和特殊的生长因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD，又称辅酶I)。本研究在临床上分离获得6株副鸡嗜血杆菌。通过培养试验、生化试验对分离获得的可疑菌株进行初步鉴定，再通过动物回归实验结合流行病学调查进一步确定为副鸡嗜血杆菌。 本研究对副鸡嗜血杆菌进行生长培养实验研究本菌在实验室的生长特点以及生长所需最适培养基，表明NAD是副鸡嗜血杆菌生长的必需因子，保证生长的最低浓度为0.625％。当NAD含量确定在0.625％以上时再加入血清可产生增菌效果。当前，缺乏有效的副鸡嗜血杆菌的商品诊断试剂盒，疾病的诊断主要依靠临床症状及流行病学的调查，确诊需要在实验室分离获得副鸡嗜血杆菌并通过细菌的形态观察、生化特性等的鉴定才能完成。本研究针对副鸡嗜血杆菌的血凝素基因(HA)保守区域自行设计一对特异性引物，建立了相应的PCR检测方法，并以购自国家兽医微生物菌种保藏中心的参考菌株和6株野生型Hpg为材料，对该方法进行了特异性、灵敏性和通用性等实验。结果显示用该引物对巴斯德氏菌科的巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌以及沙门氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增均不能获得任何条带，表明该方法的特异性较强。并将已计数的菌液作为DNA模板进行PCR扩增，可检测出浓度为104CFU/mL的副鸡嗜血杆菌，表明该方法灵敏性较强。对6株Hpg分离株的血凝素基因(HA)基因进行克隆测序，进行分子生物学特性分析后发现，所有分离株的HA基因序列大小均为1035bp，它们与GenBank上所发表的19株HA基因具有很高的相似性，达到95.1％至99.9％，说明该基因在副鸡嗜血杆菌中较为保守。 针对GenBank已发布的HA全基因序列，本研究构建了以pET-32a(+)为表达载体的Hpg HA基因的表达质粒，并转化进行了表达。分别以副鸡嗜血杆菌A型Hpg-1、B型CCM6075、C型Hpg-668为模板，通过PCR方法扩增出HA的全基因片段，然后将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中，并获得重组表达质粒pET-HA。将其转化表达宿主菌Rossetta，并用IPTG(1.0mmol/L)诱导后，经SDS-PAGE分析，最终获得大小约为57kDa的表达产物。通过Western blot检测，表达蛋白能与Hpg特异的高免阳性血清发生特异性反应，表明其具有良好的免疫原性。从而为制备针对HpgHA蛋白的单克隆抗体及进行HA蛋白的生物特性研究奠定了基础。