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研究背景与目的慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)的治疗逐步由传统化疗向分子靶向药物治疗转变,因此探索治疗新靶点及其作用机制的研究成为目前CLL研究的热点。甲状腺激素受体相互作用因子13(thyroid hormone receptor interactor 13,TRIP13)作为与多种细胞活动相关的AAA+ATP酶超家族的成员,在减数分裂同源重组、有丝分裂检查点的沉默与激活及DNA双链断裂的修复中发挥重要作用。并且TRIP13已被证实在十多种人类肿瘤中高表达并参与肿瘤的发生发展,是很有潜力的治疗新靶点与预后指标,但在CLL中的相关研究还非常少。因此,本研究希望通过在细胞系Granta-519和JVM-2上敲低/过表达TRIP13来探索TRIP13对CLL细胞增殖与凋亡的调控作用及其可能的分子机制。方法1.从CLL患者和正常人外周血标本中分离CD19+B淋巴细胞,并使用实时荧光定量PCR技术检测正常B淋巴细胞、CLL患者的B淋巴细胞及细胞系Granta-519和JVM-2的内源性TRIP13表达水平。2.使用慢病毒感染技术构建敲低/过表达TRIP13的Granta-519细胞和JVM-2细胞及其阴性对照组细胞,使用荧光显微镜判断慢病毒对细胞的感染效率,使用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹法评估敲低/过表达的效果。3.使用CCK-8法检测Granta-519细胞和JVM-2细胞的增殖能力。以慢病毒感染后72h为起点时间,共检测24h、48h、72h、96h和120h五个时间点。4.慢病毒感染5日后,使用Annexin V-APC单染法检测Granta-519细胞和JVM-2细胞的凋亡率。5.慢病毒感染5日后,使用PI染色法检测Granta-519细胞和JVM-2细胞的细胞周期中各期细胞的分布。6.使用蛋白免疫印迹法检测Granta-519细胞和JVM-2细胞中P53、MDM4和Bcl-2的表达水平。结果1.与正常B淋巴细胞相比,CLL患者B淋巴细胞、Granta-519细胞和JVM-2细胞的TRIP13 mRNA水平显著升高。2.使用慢病毒在Granta-519细胞和JVM-2细胞上敲低TRIP13的效率分别为53.8%和80.3%;使用慢病毒在Granta-519细胞和JVM-2细胞上过表达TRIP13的效率分别为2.43倍和2.64倍。3.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的增殖能力显著减弱,过表达TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的增殖能力显著增强。4.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的凋亡率显著升高,过表达TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的凋亡率显著降低。5.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞明显阻滞于G0/G1期,敲低TRIP13后JVM-2细胞明显阻滞于G0/G1和G2/M期。6.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的P53蛋白的表达降低,过表达TRIP13后JVM-2细胞的P53蛋白的表达升高。7.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞的MDM4蛋白的表达升高,过表达TRIP13后Granta-519细胞和JVM-2细胞的MDM4蛋白的表达降低。8.与对照组细胞相比,敲低TRIP13后Granta-519细胞的Bcl-2蛋白的表达降低;过表达TRIP13后JVM-2细胞的Bcl-2蛋白的表达升高。结论1.CLL细胞的TRIP13表达水平显著高于正常B淋巴细胞。2.TRIP13促进CLL细胞的增殖,抑制CLL细胞的凋亡。3.TRIP13通过参与细胞周期的调控影响CLL细胞的增殖和凋亡。4.CLL细胞中TRIP13促进Bcl-2和P53蛋白的表达,抑制MDM4蛋白的表达。