研究目的三步序贯法是针对激素依赖型哮喘患者激素撤减过程的病机演变规律提出的动态治疗方案,同时气道重塑是激素依赖型哮喘发生的重要因素之一,在参与气道重塑的众多通路中,TGF-β1/Smad信号通路有着重要的地位,本研究拟以激素依赖型哮喘患者及撤减激素过程中气道重塑模型大鼠为研究对象,探索三步序贯法对参与气道重塑的TGF-β1/Smad信号通路上相关因子、产物的影响,以期了解其对激素依赖型哮喘患者及激素撤减气道重塑大鼠模型TGF-β/Smad信号通路的干预情况,探索三步序贯法对该通路的调控作用,阐明该法对SDA气道重塑发挥阻抑作用的机理。研究方法本研究在前期研究基础上,从临床观察及动物实验研究两方面进行。临床观察方面采用随机分组方法,应用三步序贯法干预SDA患者,与普米克都保进行对照研究,检测患者诱导痰、血清内相关指标变化,主要结合肺功能改变情况,了解患者治疗前后TGF-β/Smad信号通路的变化情况。动物实验方面,模拟临床SDA患者激素减量的过程,并联合哮喘气道重塑大鼠模型的建立方法,来制备撤减激素过程中的气道重塑大鼠模型,将SD大鼠随机分为气道重塑组、地塞米松撤减组、普米克令舒组、三步序贯法组和正常对照组,应用三步序贯法干预,与其余组比较肺泡灌洗液中、肺组织中相关指标浓度、阳性细胞表达及lnRNA表达的变化情况,研究其与气道重塑进展相关性等。研究结果临床研究结果表明,治疗组经三步序贯法干预后,诱导痰内N%、EOS%、 TGF-β1、Smad2,血清内TGF-β1、Smad2、Smad3均较干预前明显下降,Smad6、Smad7均较前明显升高,同时肺功能FEV1%、FEV1/FVC%两项指标也均较前明显改善,其作用效果与普米克都保的疗效相似。TGF-β1与Smad2、Smad3均呈正相关性,与Smad6、Smad7则呈负相关性,提示三步序贯法治疗SDA患者过程中,能够改善患者肺功能状况,可能是与其降低了患者痰和血中的TGF-β1、Smad2、Smad3,升高Smad7有关。动物实验结果表明,三步序贯法能够不同程度地使激素撤减过程气道重塑大鼠模型肺泡灌洗液内TGF-β1、Smad2、Smad3浓度降低,Smad6、Smad7浓度升高；使肺组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Collagen Ⅰ、 CollagenⅢ阳性细胞的表达降低,Smad6、Smad7阳性细胞的表达升高；使肺组织内TGF-β1、Smad2、Smad3及collagen Ⅰ (α1)、collagen ⅢmRNA表达降低,Smad6、Smad7mRNA表达升高,干预效果与普米克令舒相似。相关性方面,各种方法检测结果均提示TGF-β1与Smad2、Smad3、Collagen Ⅰ (α1)、CollagenⅢ呈正相关性,与Smad6、Smad7则呈负相关性。研究结论归纳以上两部分实验的结果,表明三步序贯法不仅能够改善SDA患者肺功能,亦能改善激素依赖型哮喘患者痰及血清内TGF-β1/Smad信号通路中相关指标浓度,同时在激素撤减过程气道重塑模型大鼠肺泡灌洗液内、肺组织内相关指标浓度、阳性细胞表达及mRNA表达的改善方面发挥作用,提示其可能是通过对TGF-β1/Smad信号转导通路中相关因子TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad6、Smad7的调控,纠正Smad调节型和抑制型蛋白的失衡关系,抑制TGF-β1信号在胞内的转导,进而使Ⅰ、Ⅲ胶原在肺组织中沉积含量得到改善,从而实现对气道重塑的阻抑作用。