钩吻属马钱科植物胡蔓藤的全草,具有一定的生物毒性,传统用药下主要治疗关节炎、神经性疼痛等;中国古典记载,钩吻还具有抗寄生虫和促进畜禽生长的功效。现代研究表明从钩吻中提取的吲哚类生物碱是其主要化学成分,为了避免治疗窗口的狭隘性而引起临床中毒,多用HPLC、GC-MS/MS、LC-MS/MS等方法检测钩吻生物碱中含量较高的钩吻素甲、钩吻素子和毒性最强的钩吻素己。但存在样品前处理复杂、检测种类单一的问题,不能满足临床上简单、快速的测定要求。因此,本论文使用二维液相色谱（2D-LC）建立一个同时检测钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己的方法,同时进行了方法确证和临床实际应用。2D-LC由第一维离子交换色谱（IEX1）柱-捕集柱-第二维反相色谱（RP2）柱组成,检测的生物样品包括血浆、尿液和组织（肌肉、肝、肾）,样品采集后经过简单的蛋白沉淀或离心后直接大体积进样。化合物在第一维离子交换色谱柱（ASTON SXI 3.525 mm,5μm）上进行初步分离和富集,通过捕集柱（ASTON SN 4.610 mm,5μm）截取目标化合物进行保留,然后转移到第二维反相色谱柱（ASTON BPR2 4.610 mm,5μm）上进一步分离并进入紫外检测器进行检测。第一维色谱流动相为10 mM?L^-1磷酸二氢铵（PH=7.5）:水:乙腈（30:14:56）,流速1.0 mL?min^-1,辅助流动相为纯水,第二维色谱流动相为10 mM?L^-1磷酸二氢铵（PH=3.0）:10 mM?L^-1磷酸二氢铵（PH=7.5）:乙腈（63:12:25）。对该方法进行了专属性、LOD和LOQ、线性范围、提取回收率、转移回收率、准确度、精密度及稳定性的方法学确证。结果表明,所建立的二维液相方法可以去除样品中大部分杂质,在相应的范围内线性关系良好,相关系数r²>0.9979,检出限分别为10 ng?mL^-1、10 ng?mL^-1及10 ng?mL^-1(或25 ng?mL^-1),且样品的分析周期仅需15 min,低于近年来钩吻液相色谱的检测。三种钩吻生物碱的提取回收率为83.6%-115.2%,日内、日间精密度的相对标准偏差均不超过14.6%。通过以上研究,本文建立了钩吻素甲、钩吻素子和钩吻素己在生物样品中的二维液相色谱检测方法,全面考察了该方法的实用性。其研究结果为钩吻的残留毒理分析,药代动力学研究和临床中毒诊治提供技术支撑。