B组柯萨奇病毒感染鼠肌细胞的定量观察

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目的:利用表达增强绿荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)或海肾荧光素酶(humanized form of Renilla luciferase,hRLuc)的B组3型柯萨奇病毒(coxsackievims B3,CVB3)重组株CVB3—eGFP和CVB3—hRLuc,定量观察CVB3感染鼠肌细胞的过程。 方法: 用亚致死剂量的CVB3—eGFP和CVB3—hRluc感染原代Balb/c小鼠和SD大鼠的心肌细胞、骨骼肌细胞以及传代大鼠成肌细胞系H9c2,观察eGFP、hRLuc表达以及细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)。 结果: 当用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1时的CVB3—eGFP感染时,可在少数心肌细胞中(小鼠和大鼠)看到绿荧光表达,但是大多数心肌细胞处于存活状态;在大鼠骨骼肌和H9c2细胞中未见绿色荧光,而小鼠骨骼肌细胞全部被杀死。用1 MOI的CVB3—hRLuc感染,感染后24~36h在小鼠和大鼠心肌细胞中可以见到荧光素酶活性的明显升高,之后就降低。小鼠骨骼肌细胞中也可见荧光素酶活性的明显上升,而大鼠骨骼肌细胞和H9c2细胞未见升高。 结论: 当用亚致死剂量的CVB3攻击心肌细胞会有病毒的暂时性增殖,但是不能发展为溶细胞感染。小鼠心肌细胞对于CVB3感染要比大鼠心肌细胞易感。虽然H9c2源于大鼠心肌组织,但是它对CVB3感染的反应却与大鼠骨骼肌一致。这个定量研究表明宿主细胞的因素决定CVB感染的模式。
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