O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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口蹄疫是一种烈性传染病,通过空气等多种途径传播,有广泛的动物宿主,并对人也有感染性,是受到广泛关注的人畜共患病之一。根据国际兽疫局(OIE)1996年文件规定,一旦口蹄疫暴发,所有感染和相接触的动物都必需屠杀。大量动物死亡以及因口蹄疫而引起其他无疫情国家的贸易壁垒将会给经济带来沉重的打击。因此,预防是解决问题的唯一办法。 本论文根据GeneBank中O型口蹄疫病毒序列(accession no.X00871)以及相对应的VP1基因序列设计并克隆了多表位VP1基因,用Nde Ⅰ和Sal Ⅰ将该基因连接到DNA疫苗载体-Pet28a构建了Pet28a/vp1重组质粒。对重组表达质粒Pet28a/vp1鉴定正确后,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE和Westem blotting检测结果表明,O型口蹄疫VP1基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中得到了正常表达,表达的蛋白为融合蛋白,分子量29KD。该蛋白与标准O型口蹄疫病毒阳性血清具有特异性抗原/抗体反应,说明该融合蛋白具有免疫学活性。
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