甘蓝小孢子培养几个因素探讨和DH植株再生技术研究

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本试验进行了甘蓝游离小孢子培养技术和DH株再生技术研究,主要探讨了花蕾的长度,不同基因型,花蕾供体植株生长环境和不同自交世代对小孢子诱导出胚的影响以及不同培养基组成队胚状体诱芽效果;同时进行了小孢子再生植株倍性鉴定和开展了胚状体不定芽叶片再生DH植株技术研究。获得研究结果如下:1.甘蓝小孢子发育处于单核靠边期的花蕾长度初花期最短,花蕾长度范围差值最大,在0.3 cm~0.6 cm之间;盛花中、后期最长,一般为4.8 cm~5.9 cm,花蕾长度范围差值最小;甘蓝初花期是进行小孢子培养的最佳时期。2.甘蓝10份不同基因型材料小孢子培养其产胚率不同,出胚率为0.2胚/蕾到24.77胚/蕾,相差24.57胚/蕾,万福出胚率最高,PH09-5-1出胚率最低;基因型是影响小孢子出胚的主要因素。3.甘蓝不同自交世代植株诱导小孢子出胚能力存在差异,自交三代(S3)平均出胚率最高,为18.79胚/蕾,自交四代(S4)平均出胚率最低,为6.52胚/蕾;不同自交世代间的出胚率高低为,S3>S2>S4,自交三代(S3)有利于小孢子诱导培养。4.甘蓝在温室中培养比大田栽培有利于小孢子出胚,甘蓝12份材料出胚率比较,9份材料温室高于大田,温室与大田的出胚率差值为0.69胚/蕾~15.16胚/蕾;3份材料大田高于温室,大田与温室的出胚率差值为2.43胚/蕾~12.47胚/蕾;温室栽培甘蓝有利于获得更多的小孢子胚状体。5. 16种培养基中,B5+琼脂10g/L+蔗糖30g/L +NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L是甘蓝胚状体诱导分化不定芽的最好培养基,不定芽分化频率和不定芽分化系数均为最高,分别为291.2%和4.67。6.甘蓝小孢子胚状体再生植株中多种类型的倍性植株均同时存在,其中碧实绿和万福两个品种的小孢子再生植株双单倍体(DH)率分别为74%和82%。7.甘蓝游离小孢子不定芽叶片作为外植体再生植株时,在MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L培养基上再生芽诱导频率为64.29%,分化系数为4.03;在MS+6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L + GA3 1.5 mg/L培养基上再生芽诱导频率为80.36%,分化系数为4.15,较未添加GA3再生芽诱导频率增加16.07%,分化系数增加0.12。甘蓝DH株生长日龄为25 d的叶片作为外植体诱导再生芽效果最好。
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