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第一部分 Th1、Th2和Th17与兔颈动脉粥样硬化形成的相关性研究 目的:探讨建立一个适合实验研究的颈动脉粥样硬化狭窄(carotid atherosclerotic stenosis,CASS)动物模型的方法,为下一步实验奠定基础;通过检测斑块中Th1、Th2和Th17的标志物的表达,探讨它们在CASS发生、发展中的作用。 方法:日本大耳白兔40只,在颈总动脉上采用气体干燥损伤血管内膜的方法制造特定条件的损伤(160ml/min×15min),然后以高脂饲料喂养动物不同时间(30天,60天和90天)建立CASS模型。通过B超、血脂测定、DSA、HE染色方法评价各组动物血管狭窄程度,观察其病理改变特点。按上述方法制成CASS兔30只兔,正常兔普通饲料喂养10只作为对照组,在麻醉下分离颈总动脉后灌注固定取材。应用免疫组化方法观察Th1、Th2和Th17的表达因子IFN-γ、IL-4和IL-17的变化,评价各组动物AS斑块中IFN-γ、IL-4和IL-17细胞因子表达情况。 结果: (1)平均狭窄率为:30天组:26.59%±4.81%;60天组:49.12%±2.96%;90天组:71.53%±3.65%,建模成功率达到80%。病理检查证实:随着高脂饲料喂养时间的延长,AS狭窄程度在加重,90天组标本的AS病理改变属于成熟期AS表现(粥样斑块期)。 (2)IFN-γ和IL-17的表达在正常血管内中膜中无明显表达, IL-4无表达;与正常组相比,实验组IFN-γ和IL-17呈强阳性表达,IL-4仍呈弱阳性表达; IFN-γ在实验组60天和90天较30天组表达明显增多(P<0.05);IL-4在30天、60天、90天表达无变化;IL-17随着喂养时间的延长,表达逐渐增高(P<0.05)。 结论:用干燥气体损伤加高脂饲料喂养家兔的方法能成功建立CASS模型,建模后的狭窄程度和病理改变符合CASS实验研究需要;Th1和Th17在AS中的激活与AS病变的发生发展密切相关,起到促进作用;而Th2细胞对AS形成无明显作用。 第二部分 Th1、Th2、Th17、 Ang II水平与2型糖尿病患者形成颈动脉狭窄的关系 目的:探讨Th1、Th2、Th17和Ang II水平在T2DM合并颈动脉狭窄患者中的关系; 方法:在我院(内蒙古医科大学附属医院)于2014年9月至2015年6月,选择T2DM合并颈动脉狭窄患者(CA组)30例,2型糖尿病患者(T2DM组)20例和健康体检者10例。收集患者的临床资料。同时,分离的外周血单核细胞用来检测Th1、Th2和Th17细胞比例;其转录因子T-bet、GATA3和RORγt和其特征因子IFN-γ、IL-4和IL-17用流式细胞术检测;Ang II水平用放射免疫测定方法检测。 结果:CA组Ang II表达明显高于T2DM组和对照组(P<0.05)。Th1和 Th17阳性细胞的转录因子 T-bet和 RORγt以及其表达因子IFN-γ和IL-17在CA组明显高于T2DM组和对照组(P<0.05)。 结论:T2DM合并颈 AS患者外周血效应性 T细胞活性发生显著变化;Th1和 Th17细胞可能促进了 T2DM患者形成颈动脉粥样硬化的发生和发展;Th2对其形成和发展无作用;血浆中高AngII水平在T2DM致颈AS进程中起到积极地推动作用 第三部分 Ang II对Th1、Th2、Th17活性的影响 目的:研究效应性T细胞及其相关表达因子在Ang II刺激剂和Ang II拮抗剂作用下表达的关系; 方法:选择10例健康体检者,分离外周血单核细胞之后应用ELISA和RT-PCR分别检测效应性T细胞及其相关因子,加用Ang II刺激剂和Ang II拮抗剂后观察T细胞的变化。 结果:健康体检者的外周血细胞在Ang II刺激剂作用下,效应性T细胞活性和Th1、Th2和Th17的特征因子IFN-γ、IL-4和IL-17以及转录因子T-bet、GATA3和RORγt的表达明显增多(P<0.05),而在Ang II拮抗剂作用下效应性 T细胞活性和相关的表达因子表达明显减少(P<0.05)。 结论: Ang II可以上调Th1和Th17活性,可以使相关促炎因子的表达增多,会促进炎症反应和CA形成;阻断Ang II的表达有益于防治合并高Ang II水平的T2DM患者发生AS。