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目的:研究M3与β-catenin在大鼠心室肌的关系,M3受体与粘连蛋白β-catenin在大鼠心肌缺血时的结构相互作用,初步探讨该关系对大鼠慢性心肌缺血过程的保护机制,为筛选抗心律失常药物新靶点提供依据。
方法:通过结扎大鼠左旋冠状动脉前降支建立心肌缺血模型,分为对照组,缺血1小时组,缺血6小时组,缺血1个月组。同时建立胆碱干预的急性心肌缺血模型,在缺血前15min iv胆碱10mg/kg,用Western blot检测胆碱对β-catenin表达的影响。取心脏组织,并分别用Western blot和免疫荧光法观察β-catenin随着缺血时间的延长蛋白表达的变化;分别用激光共聚焦显微镜及免疫沉淀与免疫印迹方法,研究M3受体与β-catenin在大鼠心室肌结构关系。
结果:随着缺血时间的延长,β-catenin表达增加。M3与β-catenin存在结构共定位关系,免疫沉淀发现随着缺血时间的延长,二者共定位关系加强;且在急性心肌缺血模型中,胆碱组β-catenin的表达高于缺血组,且胆碱能增强两者的结构共定位关系,而且胆碱的这种作用能被4-DAMP所拮抗。M3作为一种G蛋白偶联受体,磷酸化的M3随着缺血时间的延长表达增加。
结论:在心肌缺血时β-catenin的活性增强与M3和β-catenin在大鼠心室肌细胞存在结构共定位关系有关,这种共定位关系可能是抗心律失常药物作用的新靶点。