【摘 要】
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目的:探究LATS1基因在骨肉瘤中发挥的作用,利用去甲基化药物使LATS1基因的表达增高,从而研究其对人骨肉瘤细胞功能的影响。方法:（1）免疫组织化学染色检测人骨肉瘤组织和正常骨组织中的大肿瘤抑制基因-1（Large Tumor Suppressor gene 1,LATS1）基因的表达差异情况。采用q RT-PCR检测人骨肉瘤组织、正常骨组织和成骨细胞（Hfob1.19）、人骨肉瘤细胞系（Sao
【基金项目】
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山西省自然科学基金项目“脊柱结核进展中微环境改变导致脊髓易损性增高的病理机制” （编号:201901D111373）；
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目的:探究LATS1基因在骨肉瘤中发挥的作用,利用去甲基化药物使LATS1基因的表达增高,从而研究其对人骨肉瘤细胞功能的影响。方法:（1）免疫组织化学染色检测人骨肉瘤组织和正常骨组织中的大肿瘤抑制基因-1（Large Tumor Suppressor gene 1,LATS1）基因的表达差异情况。采用q RT-PCR检测人骨肉瘤组织、正常骨组织和成骨细胞（Hfob1.19）、人骨肉瘤细胞系（Saos2、U2）中m RNA水平的表达差异。使用蛋白免疫印迹法（Western-Blot）检测成骨细胞（Hfob1.19）、人骨肉瘤细胞系（Saos2、U2）蛋白水平的表达差异。（2）应用甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）检测人骨肉瘤细胞系（Saos2和U2）中LATS1的甲基化状态,利用5-氮杂-2脱氧胞苷（5-Aza-2′Deoxycytidine,DAC）去甲基处理Saos2细胞和U2细胞。分别设置对照组、溶剂组和实验组。应用q RT-PCR检测各组细胞中LATS1的m RNA表达,利用Western-Blot检测各组细胞中LATS1的蛋白表达。检测药物处理后各组细胞中LATS1对骨肉瘤细胞增殖（RTCA）、凋亡（流式细胞术）和侵袭（Transwell）等生物学特性的影响。结果:（1）免疫组化结果显示:LATS1呈胞质表达,骨组织中的表达量高于骨肉瘤组织（P<0.0001）。q RT-PCR结果显示:LATS1在骨肉瘤中呈低表达（P<0.0001）;LATS1在骨肉瘤细胞系Saos2、U2中呈低表达（P<0.001）。Western-Blot结果显示:LATS1在骨肉瘤细胞系Saos2、U2中呈低表达（P<0.001）。（2）LATS1基因在骨肉瘤细胞系Saos2和U2中存在甲基化。q RT-PCR结果显示,LATS1在Aza-Saos2组中表达量高（P<0.0001）,在Aza-U2组中表达量高（P<0.05）。Western-Blot结果显示,LATS1在Aza-Saos2中呈高表达（P<0.001）,在实验组Aza-U2中呈高表达（P<0.01）。RTCA结果显示与骨肉瘤Saos2和U2细胞相比,实验组Aza-Saos2的增殖明显降低（P<0.01）,实验组Aza-U2的增殖明显降低（P<0.01）;流式细胞术结果显示,与骨肉瘤Saos2和U2细胞相比,实验组Aza-Saos2的凋亡明显增高（P<0.01）,实验组Aza-U2的凋亡明显增高（P<0.0001）;Transwell结果显示,与骨肉瘤Saos2和U2细胞相比,实验组Aza-Saos2的侵袭能力明显减弱（p<0.0001）,实验组Aza-U2的侵袭明显减弱（p<0.01）。细胞划痕实验结果显示:与骨肉瘤Saos2和U2细胞相比,实验组Aza-Saos2的迁移明显减弱Saos2（P<0.001）,实验组Aza-U2的迁移率明显减弱U2（P<0.001）。结论:（1）LATS1基因在骨肉瘤的发生发展中起到了重要作用。（2）LATS1基因在骨肉瘤细胞中甲基化程度较高。（3）给予去甲基化药物处理后能够显著上调LATS1基因m RNA和蛋白水平。（4）LATS1基因能够抑制Saos2和U2细胞的增殖能力,诱导其发生凋亡,阻止其发生侵袭。
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