目的确定济川煎物质基准的制备工艺,并对济川煎物质基准进行全面质量控制,确定科学合理的济川煎物质基准的质量标准草案,为济川煎的开发研究奠定基础。方法一、建立济川煎物质基准中松果菊苷、毛蕊花糖苷、藁本内酯、柚皮苷、新橙皮苷、异阿魏酸含量的测定方法学。采用此方法,以济川煎物质基准中松果菊苷、毛蕊花糖苷、藁本内酯、柚皮苷、新橙皮苷、异阿魏酸含量的权重量为指标,对济川煎物质基准制备过程中的饮片浸泡时间、煎煮火候、煎煮时间、过滤方式和干燥方式等影响因素进行考察,以确定济川煎物质基准的制备工艺。通过测定15批济川煎物质基准出膏率验证其制备工艺的稳定性。在此基础上,测定15批济川煎饮片和物质基准中多指标成分含量,为济川煎物质基准的定量研究提供依据。并测定济川煎物质基准多指标成分转移率,揭示济川煎多指标成分从“饮片-物质基准”的量值传递关系。二、建立济川煎物质基准指纹图谱的HPLC色谱法;采用此方法建立15批济川煎物质基准的指纹图谱,对其进行峰归属和峰指认,并经“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”、SPSS 22.0及SIMCA 14.1软件对15批济川煎物质基准样品的HPLC指纹图谱进行相似度评价及聚类分析、偏最小二乘判别分析等化学模式识别,对济川煎物质基准的质量进行整体评价。三、为全面完善济川煎物质基准的质量控制标准,对济川煎物质基准进行理化性质检测(性状、pH值、相对密度)和定性鉴别(显微鉴别和薄层鉴别)。最终基于济川煎物质基准的制备工艺、含量测定、指纹图谱、理化性质检测及定性鉴别研究,确立济川煎物质基准的质量标准草案,为济川煎物质基准的质量控制提供依据。结果一、建立了济川煎物质基准中松果菊苷、毛蕊花糖苷、藁本内酯、柚皮苷、新橙皮苷、异阿魏酸含量的测定方法,其专属性、线性关系、精密度、重复性、加样回收率均良好,表明该方法可用于济川煎物质基准多指标的含量测定。确定济川煎物质基准的制备工艺为:精密称取肉苁蓉7.46 g、当归11.19 g、牛膝7.46 g、泽泻5.60 g、枳壳3.73g、升麻1.87 g。加水300 ml,浸泡60 min,武火煮沸后文火加盖煎煮至160 ml,200目筛网趁热过滤,滤液即济川煎物质基准煎煮液,浓缩,再经冷冻干燥,得济川煎物质基准干膏粉。15批济川煎物质基准的出膏率平均值为21.59%,未出现离散数据(平均值的70%～130%以外),表明济川煎物质基准制备工艺稳定。15批济川煎物质基准中松果菊苷、毛蕊花糖苷、藁本内酯、柚皮苷、新橙皮苷及异阿魏酸的含量分别为4.0916mg/g～4.6131 mg/g、1.6521 mg/g～1.9105 mg/g、5.0196 mg/g～5.3010 mg/g、4.2742 mg/g～4.5794 mg/g、2.4102 mg/g～2.5725 mg/g、0.1786 mg/g～0.3131 mg/g,为济川煎物质基准的定量研究提供依据。15批济川煎物质基准中松果菊苷、毛蕊花糖苷、藁本内酯、柚皮苷、新橙皮苷及异阿魏酸的转移率平均值分别为71.20%、66.83%、48.33%、69.72%、68.03%、72.64%,表明肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷、当归中藁本内酯、枳壳中柚皮苷和新橙皮苷及升麻中异阿魏酸均可稳定传递到济川煎物质基准中。二、建立了济川煎物质基准指纹图谱的HPLC色谱法,其共有峰的精密度、重复性、稳定性相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于5%,表明该方法可用于济川煎物质基准质量的整体评价。采用此方法建立15批济川煎物质基准的指纹图谱,相似度均>0.90,标定了18个共有峰,其中峰1来源于肉苁蓉、牛膝和枳壳;峰2来源于泽泻;峰3来源于肉苁蓉和枳壳;峰4来源于当归和牛膝;峰5、9、11、12、13、14来源于枳壳;峰6、10来源于肉苁蓉;峰7来源于当归和升麻;峰8、15、16、17来源于升麻;峰18来源于当归。并指认了7个共有峰,其中6号峰为松果菊苷,7号峰为阿魏酸,8号峰为异阿魏酸,10号峰为毛蕊花糖苷,12号峰为柚皮苷,14号峰为新橙皮苷,18号峰为藁本内酯。运用聚类分析和偏最小二乘判别分析法将15批济川煎物质基准样品分为2类:S6、S8、S2、S5、S14、S11、S12批次样品聚为第1类,S7、S15、S3、S4、S13、S1、S9、S10批次样品聚为第2类,其原因可能是15批济川煎物质基准中各饮片产地不同;确定对济川煎物质基准整体质量贡献较大的成分分别为6号峰(松果菊苷)、14号峰(新橙皮苷)、18号峰(藁本内酯)、12号峰(柚皮苷)、7号峰(阿魏酸)、8号峰(异阿魏酸)、10号峰(毛蕊花糖苷)、9号峰(未知)、13号峰(未知),表明15批济川煎物质基准整体质量稳定,其指纹图谱能反映济川煎物质基准的整体质量概貌。三、检测济川煎物质基准理化性质,其性状为深棕色粉末,气微味甘,微苦;pH平均值为5.50,偏酸性;相对密度平均值为1.015 g/ml,表明济川煎物质基准的理化性质较稳定。并对济川煎物质基准进行显微鉴别,其中当归薄壁细胞纺锤形,有极微细的斜向交织纹理;枳壳薄壁细胞中含草酸钙方晶;升麻韧皮纤维成束,淡黄绿色,末端狭尖或钝圆,有的有分叉;牛膝木纤维成束,壁较薄,纹孔斜裂缝状;泽泻薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,集成纹孔群;内皮层细胞垂周壁波状弯曲,较厚,有稀疏细孔沟。济川煎物质基准薄层色谱鉴别结果表明济川煎物质基准供试品色谱中,在与肉苁蓉、当归、枳壳、升麻、牛膝、泽泻对照药材色谱和松果菊苷、柚皮苷对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。基于济川煎物质基准上述研究,成功确立了济川煎物质基准的质量标准草案。结论本研究确定济川煎物质基准制备工艺,测定了15批济川煎物质基准多指标成分含量和转移率。并建立15批济川煎物质基准的指纹图谱,相似度均>0.90,标定了18个共有峰,并指认了7个峰,经化学模式识别将15批济川煎物质基准分为2类,确定对济川煎物质基准整体质量贡献较大的9个成分。对济川煎物质基准进行理化性质检测和定性鉴别。基于济川煎物质基准的定量研究、理化性质检测、定性鉴别及指纹图谱,全面建立相应的质量评价方法,确定济川煎物质基准的质量标准草案。