论文部分内容阅读
特发性肺纤维化(Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性、渐进性的间质性肺病,中位生存期短且无特效治疗药物。目前研究认为慢性炎症和肺泡毛细血管内皮屏障破坏与IPF的发生发展密切相关。鞘氨醇-1-磷酸-受体1(Sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1P1)是一种 G 蛋白偶联受体,在调节淋巴细胞运输和血管屏障保护中发挥重要作用。SYL927是中国医学科学院药物研究所自主合成的新型选择性S1P1激动剂,基于S1P1在抗炎免疫和血管内皮屏障调节方面的重要作用,我们对SYL927治疗IPF进行了药效学研究及初步的机制探索。首先建立了博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型考察了 SYL927对IPF的初步治疗作用。研究发现,SYL927可以显著提高肺纤维化小鼠生存率,改善多项肺功能,并显著降低肺组织的炎细胞浸润及胶原沉积。Western Blot实验进一步证明,SYL927可以显著上调小鼠肺组织上皮表型标志物ZO-1和E-cadherin表达,下调间质表型标志物Snail的表达,并下调基质重要组成蛋白纤维粘连蛋白Fibronectin表达。提示,SYL927对IPF有显著的治疗作用,并可能与其抗炎作用及屏障保护功能相关。肺泡毛细血管屏障主要由毛细血管内皮细胞,肺泡上皮细胞及各自的基底膜构成。因而我们分别考察了 SYL927对毛细血管内皮细胞和肺泡上皮的作用。体外应用激光共聚焦显微镜定性观察表明,SYL927能够通过诱导纤维肌动蛋白F-Actin重塑促进肌动蛋白环形成并诱导紧密连接相关蛋白ZO-1定位于细胞膜内侧,显著促进血管内皮细胞的紧密连接。FITC-BSA血管内皮渗透性实验定量研究进一步表明,SYL927能够显著降低血管的通透性,增加内皮细胞的紧密连接。体内小鼠腹腔毛细血管渗漏实验亦表明,SYL927预防给药可以明显降低醋酸诱导的毛细血管渗漏,作用强度与阳性对照药地塞米松相当。提示,SYL927对毛细血管内皮细胞的连接具有很好的促进作用。肺泡上皮细胞间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及血管内皮细胞间质转化(Endothelial-mesenchymal transition,EndoMT)是肌成纤维细胞的重要来源,也是屏障损伤的重要关键因素。Western Blot研究表明,SYL927对TGF-β1诱导的EMT/EndoMT具有很好的逆转作用,能够上调肺泡上皮细胞A549细胞上皮marker E-cadherin表达,下调间质marker Snail的表达,并显著下调血管内皮细胞EA.hy926细胞Fibronectin、Snail以及Slug的表达。综上所述,本研究表明SYL927对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化有显著疗效,其作用机制可能与其抗炎免疫作用及保护肺泡毛细血管内皮屏障功能有关。提示,靶向调节S1P1有望成为治疗IPF的新策略。胃癌是一种高患病率高致死率的恶性肿瘤,尤其在我国高发,预后较差,且现有治疗药物有限。PI3K是调节细胞生长、增殖、代谢、转移、凋亡等生命活动的重要调控通路。目前研究表明,胃癌存在广泛的PI3K信号通路过度激活以及PIK3CA与PTEN基因突变。化合物6a、7a是中国医学科学院药物研究所许恒研究员课题组合成的新型Pan-PI3K抑制剂。基于PI3K信号通路在胃癌发展中的重要作用,我们对化合物6a、7a进行了治疗胃癌的药效学研究及初步机制探索。首先通过MTT细胞增殖实验检测6a、7a对PIK3CA/PENT双突变的人胃癌细胞株HGC-27的体外抑制活性。研究发现,化合物6a、7a可以显著抑制HGC-27细胞在体外增殖。PI染色法检测细胞周期以及Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡结果表明,化合物6a、7a作用于HGC-27细胞24h可以将细胞阻滞于G0/G1期并促进细胞凋亡。Western Blot实验进一步表明,化合物6a、7a作用于HCG27 3h可以有效抑制PI3K信号通路相关蛋白P-AKT(S473)、P-S6RP与P-4E-BP的表达,从而有效抑制该信号通路活化提示新型Pan-PI3 K抑制剂6a、7a可以通过抑制HGC-27细胞中PI3K信号通路从而抑制细胞增殖,使细胞出现G0/G1期阻滞并诱导细胞凋亡。基于上述体外实验,进一步建立了人胃癌细胞株HGC-27裸鼠异体移植瘤模型考察了化合物6a、7a对胃癌的体内抑制活性。研究发现,化合物6a(40mg/kg)、7a(20/40mg/kg)均可显著抑制肿瘤增殖且7a(40mg/kg)对肿瘤抑制率可达88.67%。肿瘤组织免疫组化检测表明,化合物6a(40mg/kg)、7a(20/40mg/kg)均可有效抑制肿瘤增殖标志物Ki67的表达,同时抑制肿瘤组织中P-AKT(S473)的表达。本研究证实,Pan-PI3K抑制剂6a、7a可以通过抑制PI3K信号通路可以有效抑制胃癌细胞HGC-27的体内外增殖,并使HGC-27细胞出现G0/G1期阻滞、诱导其凋亡。