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促红细胞生成素(EPO)作为由肾脏分泌的，对人体红细胞生成具有重要调节作用的肽类激素，不仅在临床治疗中有广泛的应用价值，而且由于其能够促进血液中红细胞数量增加，从而提高血液的携氧能力，也被一些耐力项目运动员违禁使用，以提高运动成绩。本论文以重组人促红细胞生成素(rHuEPO)为分析对象，结合生物素-亲和素放大体系，建立了测定EPO总量的竞争免疫分析方法。
罂粟碱作为一种重要的阿片类生物碱，被广泛地应用于临床治疗中。而中药罂粟壳不仅具有敛肺、涩肠和止痛等临床疗效，而且由于其含有的多种易成瘾性生物碱成分，更被一些不法商贩作为食品添加剂违禁使用。尽管对于罂粟碱和罂粟壳已经发展了多种检测方法，但均需依赖大型复杂分析仪器和复杂样品处理方法，且检测灵敏度有限。为适合现场快速检测和大量样品初筛的需要，本论文以抗原－抗体反应为基础，建立了高灵敏度、抗干扰能力强、高通量、高特异性的免疫分析检测方法。本论文的主要结论和创新之处在于：
1.rHuEPO单克隆抗体和多克隆抗体的制备。采用细胞融合技术和动物免疫方法获得了rHuEPO的单克隆和多克隆抗体。分别测定了两种抗体的亲和常数，同时建立了两种抗体相应的ELISA方法用于检测rHuEPO。针对多克隆抗体，为提高检测的灵敏度还将生物素－亲和素放大体系应用于ELISA方法，实现了对rHuEPO的检测。rHuEPO的抗体制备实验结果证明，用rHuEPO本身作为免疫原直接免疫动物时，免疫原性较差，难以获得高亲和力的抗体。未来的工作可从改造抗原，提高其免疫原性或采用抗体库筛选技术，减小对抗原免疫原性的依赖等方面努力。另外配合适当的筛选方法，还有可能获得专门针对rHuEPO糖基部分的单链抗体，从而达到直接区分rHuEPO和天然EPO的目的。
2.独特的罂粟碱全抗原合成方法。采取脱除罂粟碱分子苄基上的一个甲氧基，形成酚羟基，并进一步活化与载体蛋白偶联的方法，成功获得了罂粟碱的全抗原。由于这种罂粟碱活化位置的选择最大限度地保持了罂粟碱分子特征结构的完整性，使得用该全抗原免疫动物获得的多克隆抗体在特异性和亲和力方面都较文献报道方法有显著的提高。该抗体与固定化抗原亲和常数为7.3×107L/mol，与生物碱类其它物质吗啡、可待因和甲基罂粟林等交叉反应均低于1％，与罂粟醇交叉反应为31％。这种抗原合成方案以前在国内外都未见报道。
3.常规ELISA方法和生物素－亲和素放大体系ELISA方法检测罂粟碱。
利用所制得的多克隆抗体，建立了定量分析血清样品中罂粟碱含量的酶标二抗竞争型ELISA方法，方法线性范围为0.1-1000ng/mL，针对血清样品的最低检测限为0.25ng/mL，其回收率可达98-105％。所建立的ELISA方法比已有测定罂粟碱的ELISA方法灵敏度提高了103倍、选择性也更好。在此基础上，进一步引入生物素－亲和素放大体系，对上述ELISA方法进行了改进。并成功定量了中药罂粟壳提取液中的罂粟碱含量。该方法的线性范围为0.02-1000ng/mL，最低检测限可达0.008ng/mL，对罂粟壳提取液测定加标回收率为88％-120％。该ELISA方法比现有常规仪器分析方法(HPLC、GC)具有更高的灵敏度，且样品处理步骤大大减化，在高通量快速筛查临床样品和食品非法添加样品方面具有良好的应用前景。
A.随机偶联免疫亲和柱分离复杂样品基体中的罂粟碱和定向偶联免疫亲和柱的初步研究。成功制备了对罂粟碱具有特异性保留作用的免疫亲和柱。对其实验条件的研究表明，在4℃，以0.01mol/LPBS(pH8.3)溶液为结合缓冲液的条件下，罂粟碱的柱上保留效果最佳。在最佳吸附－解吸附条件下测定罂粟碱标准品溶液的平均回收率为86％。该免疫亲和柱已成功应用于火锅底料液和中药罂粟壳提取液样品中罂粟碱的分离纯化。在有效去除样品中的大量基体干扰物的同时，针对火锅底料液和罂粟壳提取液，其罂粟碱回收率分别可达82-106％和71％。用高碘酸氧化抗体，与酰肼化CNBr活化的Sepharose4B载体偶联反应，获得了定向化偶联免疫亲和柱，并对其进行了初步的研究。研究表明，定向化偶联免疫亲和柱对罂粟碱具有强烈的柱上保留作用，但在目前的实验条件下重复使用性能还不够理想，有待进一步研究解决。