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背景：TAM作为选择性雌激素受体调节剂（selective estrogen receptormodulators, SERM），在临床上被广泛应用于早晚期乳腺癌的治疗及术后预防。然而另一方面，TAM能增加病人体内VEGF的水平，促进乳腺肿瘤新生血管的形成，因而限制了其功能，改善治疗策略成为一种必然。有研究表明塞来昔布（celecoxib, CXB）与TAM联合应用后，增强了TAM的抗肿瘤能力，并且降低了TAM剂量，显示出联合治疗的前瞻性意义。然而众所周知，CXB能引起胃肠道反应、肝损伤等并发症。利用RNAi技术，能有效沉默细胞中COX-2基因，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制VEGF基因的表达，同时避免塞来昔布等药物产生的副作用。目的：在体外实验中，观察LV-COX-2和TAM单独及联合应用时对人乳腺癌MCF-7细胞株恶性生物学行为的影响（包括细胞增殖、凋亡、细胞周期分布、转移能力及侵袭性等），并检测对VEGF表达的影响；在体内试验中，构建人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型，评估LV-COX-2与TAM联合治疗对肿瘤生长的抑制效果。通过体内外研究，观察二者协同及增敏作用，为日后临床应用提供理论依据。方法：1.根据RNAi设计原理及基因重组技术，针对COX-2基因的靶点序列设计、合成COX-2shRNA慢病毒载体，将其转染入人乳腺癌MCF-7细胞株，通过RT-PCR和Western blot法检测转染COX-2shRNA后，COX-2基因mRNA及蛋白质表达水平。2.在体外实验中观察LV-COX-2、TAM治疗及二者联合作用时对人乳腺癌MCF-7细胞株生物学行为的影响，包括：MTT法检测细胞的增殖能力；AO/EB双荧光染色法检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞周期分布；Boyden小室及细胞划痕实验检测细胞迁移情况；Transwell法检测细胞的侵袭能力；ELISA及Western blot法检测PEG2、VEGF及VEGFR表达水平。3.建立人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠种植瘤模型，当肿瘤体积达到100-200mm3时，对各组荷瘤裸鼠给予不同的治疗手段，21d后取出肿瘤组织，测量瘤体重量和体积，观察LV-COX-2及TAM对裸鼠皮下种植瘤生长的影响。结果：1.成功构建针对COX-2基因的shRNA慢病毒载体，能够有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞中COX-2基因mRNA及蛋白质表达。2.体外实验证明，LV-COX-2与TAM治疗均能明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7细胞活力，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡及降低细胞的转移和侵袭力，二者联合作用时效果更为显著。3.裸鼠体内试验证明，LV-COX-2和TAM治疗均能明显抑制MCF-7裸鼠移植瘤的生长，瘤体重量及体积明显减小，二者联合应用时效果更佳，优于任何一个单独治疗组。结论：研究发现，COX-2沉默联合TAM治疗能显著抑制体外人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖，诱导细胞凋亡，同时亦明显抑制了裸鼠体内肿瘤的生长。此外，LV-COX-2和TAM联合治疗能够有效抑制血管内皮生长因子的表达及新生血管的形成。这些结果表明，LV-COX-2与TAM联合治疗在乳腺癌的抗转移和促凋亡研究中是一个很有前途的手段，二者联合应用具有协同和增敏作用，沉默COX-2基因增强了TAM的抗肿瘤活性。COX-2沉默联合TAM治疗是一个有潜能的治疗方案，尤其对于VEGF高表达的乳腺肿瘤来说。