柚皮甙体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:angus000
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目的:探讨柚皮甙体外诱导BMSCs向成骨细胞分化,确定诱导的最佳添加浓度。为进一步探讨柚皮甙复合骨髓间充质干细胞体内治疗股骨头缺血性坏死提供实验基础及依据。  方法:(1)使用改良全骨髓贴壁法获取新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞,培养并传代。对新西兰大白兔的骨髓间充质干细胞行形态学,表型及功能鉴定。(2)柚皮甙体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,分柚皮甙诱导组,传统经典诱导组,空白对照组。  结果:(1)使用改良全骨髓贴壁法从新西兰大白兔骨髓内获得BMSCs,在细胞的原代培养中我们体会到24h首次换液能在最短时间内形成最多的细胞集落;BMSCs在5×104/ml接种密度下用10%胎牛血清培养最适宜。细胞生长曲线显示:在第4天时细胞进入对数增殖期,第6-7天进入平台期。本实验已将细胞传到第8代,第6代之后BMSCs增值能力逐渐下降。形态学鉴定:光镜下观察,BMSCs为长梭形,呈集落样生长,细胞融合后呈放射状或者菊花状;表型鉴定:CD29表达率为11.25%±1.37,CD45不表达;功能鉴定:BMSCs向成骨细胞诱导,AKP染色呈阳性,Vonkossa染色呈阳性,Ⅰ型胶原染色呈阳性;BMSCs向脂肪细胞诱导,油红O染色阳性。(2)柚皮甙诱导 BMSCs向成骨细胞分化:CCK-8法检测结果:与空白对照组比较,40μg/L和50μg/L柚皮甙诱导液组均不影响细胞增殖(P>0.05)。各诱导组的AKP定性染色呈阳性。AKP定量检测显示含40μg/L的柚皮甙组与传统经典诱导组无差异;40μg/L的柚皮甙组与空白对照组有显著差异。  结论:(1)成功分离,培养及鉴定了新西兰大白兔的BMSCs。(2)低浓度的柚皮甙能诱导BMSCs向成骨细胞分化,40μg/L浓度组的诱导能力与经典诱导方法无显著差异性。
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