研究目的与背景:为明确HMGB1在非小细胞肺癌恶性进展和耐药性产生的作用和机制,本研究同时应用分子生物学、细胞生物学和动物学的研究方法探讨HMGB1对非小细胞肺癌的恶性进程和耐药性产生中的作用机制。研究方法:1)通过WB和qPCR法检测了非小细胞肺癌临床组织中HMGB1的mRNA和蛋白水平;通过ELISA法检测了胸腔积液中IL-1β、IL-6、IL-8和HMGB1的表达水平并进行相关性分析;通过WB检测了癌旁组织、术前组织和复发组织中耐药相关蛋白MDR1、MRPs、P-gp、LRP及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3的变化水平。2)本研究构建了耐药细胞株A549/DDP,通过qPCR和WB检测了两种细胞中HMGB1的mRNA水平和蛋白水平的表达;通过细胞转染在A549和A549/DDP构建了 HMGB1稳转细胞株;通过MTT法检测了HMGB1在A549、A549-HMGB1和A549/DDP细胞株对顺铂、多西他赛、吉西他滨、培美曲塞和紫杉醇半数抑制浓度（IC50）的影响,并绘制各组细胞对药物抑制率曲线与耐药倍数对比图,分析HMGB1与耐药的相关性。3)通过siRNA-HMGB1 RNAi干扰技术转染细胞,应用qPCR和WB检测其敲低效率;在顺铂和紫杉醇作用的A549和A549/DDP中,通过MTT法、通过集落形成实验、Transwell检测、流式细胞术、WB等验证HMGB1的基因、蛋白的表达及耐药的相关性;4)通过动物实验进一步验证HMGB1与肺癌及肺癌化疗耐药性之间的相关性。结果:1)研究IL-6,IL-8和HMGB1可能是非小细胞肺癌恶性胸腔积液的标志物;在临床组织中发现非小细胞肺癌组织中HMGB1 mRNA升高了 50%,且相应的耐药蛋白及抗凋亡蛋白随着HMGB1的升高而升高,而预后化疗组织相比手术前肺癌组织HMGB1、耐药蛋白及抗凋亡蛋白均明显升高,预示着HMGB1与耐药性、凋亡有着某种关系。2)在肺癌耐药A549/DDP细胞中,HMGB1表达水平明显高于A549正常水平含量;且随着HMGB1表达量的升高,其对不同化疗药物的耐药性均不同程度的增强,并发现A549-HMGB1与A549/DDP之间无显著性差异,认为HMGB1对耐药性的产生有着重要的作用;3)过表达HMGB1使肺癌细胞侵袭、转移、增殖、耐药性活力均增强,且抑制了细胞凋亡水平,进一步通过RNAi技术沉默下调HMGB1的表达,则会缓解上述现象,表明了 HMGB1在肿瘤中的作用;4)在对小鼠动物实验中,进一步验证HMGB1高表达会增强肿瘤的大小、侵袭、耐药性,并抑制细胞的凋亡,维持了肿瘤细胞的存活率。并发现HMGB1高表达时,HMGB1主要分布在细胞质中,且耐药相关蛋白P-gp也上调表达。HMGB1低表达时主要定位在细胞质中,且耐药蛋白表达量也下调;总结:HMGB1在非小细胞肺癌中发挥着重要作用,其调控肺癌细胞的侵袭、增殖、耐药性、凋亡能力,在临床分期中有着指示性的作用,有希望作为新的基因治疗靶位点。