【摘 要】
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粘细菌(Myxobacteria)是一类高等的原核生物,能够产生丰富的活性产物,其活性产物具有结构多样性和菌株特异性,且产生菌的比例高,是筛选抗肿瘤活性天然化合物的重要来源之一。
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粘细菌(Myxobacteria)是一类高等的原核生物,能够产生丰富的活性产物,其活性产物具有结构多样性和菌株特异性,且产生菌的比例高,是筛选抗肿瘤活性天然化合物的重要来源之一。本文对不同种属的158株粘细菌的发酵产物,采用高通量体外筛选法,进行了抗人结肠癌细胞(HCT-15)活性的检测。检测结果显示:其中48株粘细菌的发酵产物对肿瘤细胞的抑制率超过了50%,活性筛出率达30%。对18株抑制率达65%的菌株进行复筛和稳定性测试,复筛结果与初筛结果基本一致,具有良好的稳定性。选取抗肿瘤活性较高的菌株92006和菌株92094,分别对其生长曲线、不同浓度的发酵产物的抗肿瘤活性、发酵产物的稳定性进行了测定。最适种子培养时间为112h、发酵培养时间为168h、发酵期间pH值7~8;两株菌的活性产物对肿瘤细胞的抑制作用均呈现浓度依赖性;菌株92006的活性产物在酸性、碱性及加热条件下均比较稳定,菌株92094的活性产物在碱性和加热条件下较为稳定,而在酸性条件下不稳定。采用10种不同的发酵培养基对菌株92006和菌株92094进行同步培养,以湿菌体量和发酵产物对肿瘤细胞的抑制率为依据,选出3种较适宜的培养基,再与不同的种子培养基进行优化组合,结果表明:菌株92006和菌株92094的最佳种子培养基分别为CAS和G52;最佳发酵培养基分别为JA-H和lB12。此外,通过正交实验和方差分析法确定菌株92006的最佳营养成份配比为:淀粉1%,脱脂大豆粉0.1%,酵母提取物0.3%,MgSO4·7H2O 0.15%,HEPES 1.15%,CaCl20.05%,葡萄糖0.2%;菌株92094的最佳营养成份配比为:淀粉2%,胰蛋白胨1%,微量元素液0.5mL。经培养基营养条件的优化后,菌株92006和菌株92094发酵产物在10-2浓度下对肿瘤细胞的抑制率达到了91%和84%。
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