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线粒体是真核生物体内产生ATP的主要场所,其基因组(mtDNA)编码的蛋白是构成线粒体呼吸链复合体的重要亚基。PPR蛋白是指含有两个及以上串联重复的类PPR模体的蛋白质,而类PPR模体则是由35个氨基酸残基组成的结构域。粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中Ppr10蛋白对线粒体的翻译至关重要。前期的研究表明在含有线粒体内含子的背景下(yHL6381),ppr10基因(Δppr10)的缺失影响了线粒体基因组编码的RNA水平,而且在不同程度上影响了线粒体基因组编码的蛋白的合成。因此,本文主要探究Ppr10蛋白是如何参与线粒体基因组翻译的。P3是不含线粒体内含子的菌株,其mtDNA编码的mRNAs不需要内含子的剪接。这更能帮助我们诠释Ppr10蛋白在线粒体中发挥的功能。粟酒裂殖酵母的mtDNA仅包含三个内含子,cox1中有2个I型内含子分别是cox1 I 1b和cox1 I 2b,cob1中有1个II型内含子为cob1 I 1。cox1 I 1b编码DNA核酸内切酶以及成熟酶,cox1 I 2b编码DNA核酸内切酶;cob1 I 1编码的蛋白具有逆转录酶活性和成熟酶活性并参与自身剪接。在本文中,我们构建Δppr10/P3菌株。通过点圈实验,我们发现Δppr10/P3菌株在非发酵型培养基中的生长受到影响,表明在不含线粒体内含子的遗传背景下(P3)Ppr10仍然与线粒体的功能密切相关。qRT-PCR和Northern blot结果表明,相对于不含线粒体内含子的P3菌株,Δppr10/P3菌株中cox1和cob1的mRNAs水平没有受到影响。而RT-PCR的结果表明,相比于P3菌株,在含有线粒体内含子的背景下ppr10的缺失影响了cox1、cob1的mRNAs的剪切。体内同位素标记mtDNA编码的蛋白质的实验表明,ppr10基因的缺失影响了线粒体基因组编码的蛋白合成。Western blotting实验结果表明,ppr10基因缺失导致Cob1、Cox1、Cox2、Cox3、Atp6这五个蛋白的稳态水平强烈降低,几乎检测不到,Cox4蛋白稳态水平也显著性的降低。综上所述,ppr10的缺失影响了线粒体呼吸链复合体亚基的合成,使得线粒体功能受损。Ppr10蛋白是整个线粒体蛋白翻译机制的激活因子,ppr10基因的缺失影响线粒体蛋白的翻译因此不能正常编码线粒体mRNAs剪接所需要的成熟酶。也进一步验证了Ppr10在线粒体翻译中的功能。