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目的:人们长期暴露在矽尘环境中会引起肺部疾病,严重影响自身健康。矽尘进入肺组织可引起矽肺,矽肺是尘肺的一种。有研究表明,矽肺的发生同时会促进自身免疫性疾病的发生。研究表明,LC3相关吞噬作用(LAP)功能缺陷可引起自身免疫性疾病的发生。本研究采用J774A.1单核巨噬细胞,通过体外实验探讨矽尘暴露对巨噬细胞LAP功能的影响及薯蓣皂苷(dioscin)对其保护作用。研究方法:采用J774A.1单核巨噬细胞进行体外实验。不同浓度矽尘悬液处理巨噬细胞后,流式细胞术检测巨噬细胞的吞噬能力,Western Blot和RT-PCR检测LAP特异性蛋白Rubicon、NOX2和基因RUBCN、CYBB的表达水平。不同浓度薯蓣皂苷处理矽尘暴露的巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞的吞噬能力,Western Blot和RT-PCR的方法检测细胞LAP功能特异性蛋白Rubicon、NOX2在蛋白和基因水平上的表达,ELISA检测细胞炎性因子TNF-α的分泌水平。结果:1、矽尘暴露不影响J774A.1巨噬细胞的吞噬能力。不同浓度的矽尘悬液处理J774A.1单核巨噬细胞6、24、48小时后,流式细胞术检测细胞吞噬能力。与空白对照组相比,不同浓度矽尘悬液处理对于细胞的吞噬能力没有影响。2、矽尘暴露降低J774A.1巨噬细胞Rubicon、NOX2表达水平。矽尘暴露细胞6、24、48小时后,使用RT-PCR和Western Blot检测Rubicon、NOX2在mRNA和蛋白水平上的表达。结果显示,随着矽尘浓度增高,Rubicon、NOX2的表达降低,在6、24和48小时部分处理组之间具有一定统计学意义(P<0.05)。3、不同剂量薯蓣皂苷处理不影响矽尘暴露的J774A.1巨噬细胞的吞噬能力。不同浓度的薯蓣皂苷处理矽尘暴露的巨噬细胞6、24、48小时后,流式细胞术检测细胞吞噬能力。与空白对照组相比,不同剂量的薯蓣皂苷处理对矽尘暴露的巨噬细胞的吞噬能力没有影响。4、薯蓣皂苷上调矽尘暴露引起的J774A.1巨噬细胞Rubicon、NOX2表达的降低。Western Blot实验结果显示,与空白对照组相比,给予矽尘悬液处理后的Rubicon、NOX2蛋白表达降低,给予dioscin处理后,与矽尘暴露组相比,随着dioscin的浓度增高,Rubicon、NOX2的表达明显升高。RT-PCR实验结果显示,与空白对照组相比,矽尘暴露组的RUBCN、CYBB这两种基因转录水平也有不同程度的降低。与矽尘暴露组相比,不同浓度的薯蓣皂苷处理组的两种基因转录水平也有一定的升高表现。在部分处理组之间有统计学意义(P<0.05)。5、薯蓣皂苷抑制矽尘暴露引起的J774A.1巨噬细胞炎症因子分泌。ELISA实验测定结果显示,给予细胞矽尘暴露处理后在6、24、48小时肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌升高,加入薯蓣皂苷处理后分泌明显降低,在6、24、48小时3个时间点低、中、高剂量薯蓣皂苷处理组与矽尘暴露组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1、矽尘暴露和薯蓣皂苷单独或联合作用不影响J774A.1巨噬细胞的吞噬能力。2、矽尘暴露损伤J774A.1巨噬细胞的LAP功能,薯蓣皂苷对矽尘暴露导致的J774A.1巨噬细胞LAP的损伤具有保护作用。