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【目的】:
1.制备包裹吲哚菁绿（Indocyaninegreen，ICG）的磷脂聚合物（Phospholipidpolymer）纳米光敏剂（INPs），通过酰胺键连接在减毒工程菌（YB1）表面，构建纳米光敏剂工程化的沙门氏菌（YB1-INPs），对其进行理化表征。
2.对YB1-INPs进行体外趋化性实验，分析YB1-INPs的厌氧趋化和营养趋化性能。
3.对YB1-INPs进行肿瘤模型体内实验，考察YB1-INPs的肿瘤靶向效果及体内生物分布情况，并评价其在体内的抗肿瘤效果和生物安全性。
【方法】:
1.一步超声法合成包载ICG的磷脂聚合物纳米光敏剂(INPs)，并通过酰胺键共价偶联在减毒工程菌（YB1）表面，构建纳米光敏剂工程化的沙门氏菌（YB1-INPs）用于肿瘤精准治疗。采用扫描电镜（Scanningelectronmicroscopy，SEM），透射电镜（Transmissionelectronmicroscopy，TEM），动态光散射（Dynamiclightscattering，DLS），共聚焦激光扫描显微镜（Confocallaserscanningmicroscopy，CLSM），紫外/荧光仪对YB1-INPs的形貌、粒径和光学性质进行表征；采用小动物活体成像，荧光仪考察纳米颗粒交联效率；通过活死细菌染色实验，LB琼脂平板实验评价纳米颗粒对细菌的活性影响。
2.体外Transwell实验考察YB1-INPs的厌氧趋化性质和营养趋化性质；流式细胞仪定量分析YB1-INPs在缺氧环境和营养环境下的趋化迁移情况；为了更直观的呈现趋化迁移情况，通过共聚焦显微镜进行定性考察YB1-INPs的厌氧趋化性质和营养趋化性质。
3.以荷MB49膀胱瘤C57BL/6小黑鼠为研究对象，通过小动物成像系统荧光成像考察YB1-INPs的体内生物分布；免疫组织化学和免疫组织荧光验证YB1-INPs的肿瘤靶向效果以及光热协助的生物富集效果；通过肿瘤体积和小鼠存活率评价YB1-INPs抑制肿瘤的效果；采用器官组织形态学和血液生化指标评估YB1-INPs的体内生物安全性。
【结果】
1.YB1-INPs生物杂交微泳者的合成和表征：扫描电镜图像显示超过60个INPs连接在每个YB1表面。动态光散射测量结果表明，由于INPs交联到YB1表面后，YB1-INPs的尺寸略大于YB1。荧光（FL）成像结果显示，即使洗涤3次，INPs仍有效地保留在YB1上，可以实时荧光跟踪YB1-INPs。当INPs浓度为100μg/mL时，达到最大连接效率（108CFU的YB1连接INPs的量是70μg）。紫外/荧光光谱显示YB1-INPs保留了INPs的光学特性。活死细菌染色实验和LB琼脂平板实验都证明了INPs与YB1的交联不会影响YB1的活性。
2.体外趋化性分析：YB1-INPs具有厌氧和营养趋化性质。YB1-INPs的流式定量结果和共聚焦成像结果显示YB1在缺氧诱导下迁移。通过LB琼脂平板实验和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)定量分析，细胞死亡产生的营养物质能够介导YB1-INPs的趋化迁移。
3.体内实验结果评价：尾静脉注射后，YB1通过自驱动将生物相容性光热剂(INPs)递送至肿瘤厌氧核心，促进INPs有效的肿瘤富集。随后，INPs的光热作用可以杀死肿瘤细胞并且使肿瘤组织疏松，从而促进YB1-INPs在肿瘤部位的富集和渗透。在近红外（NIR）激光照射下，肿瘤区域温度达到63℃，杀死肿瘤细胞和瘤内YB1，实现安全和高效的光热治疗。
【结论】:
1.成功构建了包载ICG的纳米光敏剂后，通过酰胺键共价偶联在YB1表面制备了生物杂交微泳者（YB1-INPs）。YB1-INPs保留了YB1的厌氧靶向能力和INPs的光热转换性能。
2.YB1-INPs能够高效的递送纳米光敏剂（INPs）到达肿瘤厌氧区域。同时INPs介导的光热干预能够杀死肿瘤细胞、破坏肿瘤组织，释放吸引细菌的营养物质，进一步促进YB1-INPs的肿瘤富集。
3.YB1-INPs在厌氧靶向和光热干预的协同作用下实现纳米光敏剂INPs在肿瘤组织的高效富集，从而实现高效的实体瘤光热治疗。
1.制备包裹吲哚菁绿（Indocyaninegreen，ICG）的磷脂聚合物（Phospholipidpolymer）纳米光敏剂（INPs），通过酰胺键连接在减毒工程菌（YB1）表面，构建纳米光敏剂工程化的沙门氏菌（YB1-INPs），对其进行理化表征。
2.对YB1-INPs进行体外趋化性实验，分析YB1-INPs的厌氧趋化和营养趋化性能。
3.对YB1-INPs进行肿瘤模型体内实验，考察YB1-INPs的肿瘤靶向效果及体内生物分布情况，并评价其在体内的抗肿瘤效果和生物安全性。
【方法】:
1.一步超声法合成包载ICG的磷脂聚合物纳米光敏剂(INPs)，并通过酰胺键共价偶联在减毒工程菌（YB1）表面，构建纳米光敏剂工程化的沙门氏菌（YB1-INPs）用于肿瘤精准治疗。采用扫描电镜（Scanningelectronmicroscopy，SEM），透射电镜（Transmissionelectronmicroscopy，TEM），动态光散射（Dynamiclightscattering，DLS），共聚焦激光扫描显微镜（Confocallaserscanningmicroscopy，CLSM），紫外/荧光仪对YB1-INPs的形貌、粒径和光学性质进行表征；采用小动物活体成像，荧光仪考察纳米颗粒交联效率；通过活死细菌染色实验，LB琼脂平板实验评价纳米颗粒对细菌的活性影响。
2.体外Transwell实验考察YB1-INPs的厌氧趋化性质和营养趋化性质；流式细胞仪定量分析YB1-INPs在缺氧环境和营养环境下的趋化迁移情况；为了更直观的呈现趋化迁移情况，通过共聚焦显微镜进行定性考察YB1-INPs的厌氧趋化性质和营养趋化性质。
3.以荷MB49膀胱瘤C57BL/6小黑鼠为研究对象，通过小动物成像系统荧光成像考察YB1-INPs的体内生物分布；免疫组织化学和免疫组织荧光验证YB1-INPs的肿瘤靶向效果以及光热协助的生物富集效果；通过肿瘤体积和小鼠存活率评价YB1-INPs抑制肿瘤的效果；采用器官组织形态学和血液生化指标评估YB1-INPs的体内生物安全性。
【结果】
1.YB1-INPs生物杂交微泳者的合成和表征：扫描电镜图像显示超过60个INPs连接在每个YB1表面。动态光散射测量结果表明，由于INPs交联到YB1表面后，YB1-INPs的尺寸略大于YB1。荧光（FL）成像结果显示，即使洗涤3次，INPs仍有效地保留在YB1上，可以实时荧光跟踪YB1-INPs。当INPs浓度为100μg/mL时，达到最大连接效率（108CFU的YB1连接INPs的量是70μg）。紫外/荧光光谱显示YB1-INPs保留了INPs的光学特性。活死细菌染色实验和LB琼脂平板实验都证明了INPs与YB1的交联不会影响YB1的活性。
2.体外趋化性分析：YB1-INPs具有厌氧和营养趋化性质。YB1-INPs的流式定量结果和共聚焦成像结果显示YB1在缺氧诱导下迁移。通过LB琼脂平板实验和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)定量分析，细胞死亡产生的营养物质能够介导YB1-INPs的趋化迁移。
3.体内实验结果评价：尾静脉注射后，YB1通过自驱动将生物相容性光热剂(INPs)递送至肿瘤厌氧核心，促进INPs有效的肿瘤富集。随后，INPs的光热作用可以杀死肿瘤细胞并且使肿瘤组织疏松，从而促进YB1-INPs在肿瘤部位的富集和渗透。在近红外（NIR）激光照射下，肿瘤区域温度达到63℃，杀死肿瘤细胞和瘤内YB1，实现安全和高效的光热治疗。
【结论】:
1.成功构建了包载ICG的纳米光敏剂后，通过酰胺键共价偶联在YB1表面制备了生物杂交微泳者（YB1-INPs）。YB1-INPs保留了YB1的厌氧靶向能力和INPs的光热转换性能。
2.YB1-INPs能够高效的递送纳米光敏剂（INPs）到达肿瘤厌氧区域。同时INPs介导的光热干预能够杀死肿瘤细胞、破坏肿瘤组织，释放吸引细菌的营养物质，进一步促进YB1-INPs的肿瘤富集。
3.YB1-INPs在厌氧靶向和光热干预的协同作用下实现纳米光敏剂INPs在肿瘤组织的高效富集，从而实现高效的实体瘤光热治疗。