FM195A是派生于甘蓝型油菜宜3A的细胞核雄性不育系,其雄性败育发生在减数分裂的细线期前后,表现为染色质异常收缩且细胞周期停滞。遗传分析发现,FM195A的育性受MS5位点的三个复等位基因（MS5a、MS5b和MS5c）控制,三者显隐性关系是MS5a（恢复基因）>MS5b（不育基因）>MS5c（可育基因）。前人研究发现,MS5是一个功能未知的芸薹属特异的孤儿基因,通过参与调节减数分裂同源染色体配对、花束状结构形成、联会复合体装配和重组修复等重要事件来影响减数分裂的进程。然而,MS5调控减数分裂的分子机制仍然知之甚少。本研究从筛选与MS5特异性互作的蛋白入手,期望通过建立蛋白互作网络,为研究MS5的功能寻找突破点。该研究将加深对Yi3A类不育系不育机理的认识,有助于该不育系的遗传改良。本课题主要研究结果如下:1.MS5a互作蛋白的筛选与验证通过筛选酵母双杂交文库和酵母双杂点对点验证实验,共获得10个与MS5a互作的蛋白。结合前人关于这10个蛋白和MS5的蛋白功能研究结果,从中选定MRN复合体成员MRE11蛋白为重点候选互作蛋白。利用split luciferase complementation实验体系,构建MS5a-NLuc和MRE11-CLuc,MS5a-CLuc和MRE11-NLuc两个组合,并通过农杆菌介导侵染烟草。结果显示,MS5a和MRE11存在互作关系。2.MS5a与MRE11互作核心区域的初步确定根据MS5a蛋白结构信息,将MS5a分别截短为MS5a-1（1-96 aa）、MS5a-2（1-189 aa）、MS5a-3（96-326 aa）和MS5a-4（189-326 aa）共四段。酵母双杂交实验发现仅有MS5a-1与MRE11-A互作,说明MS5a蛋白参与互作的核心区域是1-96 aa。3.MS5a和MRN复合体成员NBS1、RAD50的互作关系利用split luciferase complementation实验,通过构建MS5a与MRN复合体成员NBS1和RAD50的载体组合,观察侵染的烟草叶片,发现MS5a和NBS1的组合可以检测到荧光信号,而MS5a和RAD50的组合未检测到荧光信号,表明MS5a和NBS1存在相互作用,但不与RAD50发生互作。4.MS5c和MRN复合体成员的互作利用酵母双杂点对点和split luciferase complementation实验验证等位基因MS5c和MRE11、NBS1、RAD50的互作关系。结果表明:MS5c可以和MRE11互作,且互作的关键区域同MS5a一样,是coiled-coil结构域;同MS5a一样,MS5c和NBS1存在相互作用,但不与RAD50发生互作。