该课题研究目的:(1)构建表达HBV抗原基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,了解腺病毒介导HBV抗原基因在哺乳动物细胞中的表达;(2)建立脐带血体外分离诱导DC的方法;(3)采用复制缺陷型重组腺病毒介导HBV抗原基因修饰脐带血来源的DC,建立抗HBV的DC疫苗,观察HBV抗原基因修饰的DC体外诱导产生特异性CTL效应,为慢性乙型肝炎的治疗探索一种新的免疫治疗措施.1.HBV抗原基因复制缺陷型重组腺病毒的制备和体外表达.2.脐带血树突状细胞的诱导培养及其生物学特性的研究.3.腺病毒介导HBV抗原基因修饰DC体外诱导特异性CTL反应. 通过以上的实验研究,首先,我们成功制备携带EGFP和3种HBV抗原基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-HBs、Ad-HBe和Ad-HBc,实验结果表明,3种复制缺陷型重组腺病毒不仅能够有效介导HBV抗原基因在连续细胞系中高效表达,也能够在干细胞中高效表达.其次,我们从脐带血中成功诱导出大量高纯度成熟DC,诱导出的DC具有典型的细胞形态,典型的表面分子表达;同时具有较强的刺激T细胞增殖能力和分泌细胞因子IL-12能力.复制缺陷型重组腺病毒能够高效介导HBV抗原基因转染DC,转染后成熟DC仍然具有较强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力和分泌细胞因子IL-12的能力.最后,我们通过复制缺陷型重组腺病毒介导HBsAg、HBeAg和HBcAg基因于修饰DC,能够在体外诱导特异性CTL效应,对HepG<,2>22.1.5靶细胞有明显的杀伤作用.总之,HBV抗原基因修饰的DC细胞,在体外能够诱导特异性抗HBV免疫应答反应,这一研究结果为DC疫苗治疗慢性乙型肝炎的进一步研究奠定了基础.