【摘 要】
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目的:本课题通过研究脑膜瘤中LUC7L3、HER2和ELK1的表达情况,探讨HER2/ELK1/LUC7L3信号轴促进脑膜瘤增殖的可能分子机制。方法:1.在恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株中,慢病毒转染干扰和过表达LUC7L3基因,将其分为五组:1)空白对照组（Blank）;2)干扰LUC7L3组（LUC7L3-sh）;3)过表达LUC7L3组（LUC7L3-ox）;4)干扰无关序列组（NC-sh
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目的:本课题通过研究脑膜瘤中LUC7L3、HER2和ELK1的表达情况,探讨HER2/ELK1/LUC7L3信号轴促进脑膜瘤增殖的可能分子机制。方法:1.在恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株中,慢病毒转染干扰和过表达LUC7L3基因,将其分为五组:1)空白对照组（Blank）;2)干扰LUC7L3组（LUC7L3-sh）;3)过表达LUC7L3组（LUC7L3-ox）;4)干扰无关序列组（NC-sh）;5)过表达无关序列组（NC-ox）,用q-PCR法检测各组细胞中HER2、ELK1、LUC7L3的m RNA表达水平变化。2.体内裸鼠成瘤实验,在裸鼠皮下接种相同数量的各组细胞,绘制恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株瘤体的生长-时间曲线,计算抑瘤率;并通过免疫组化法以及Western blot检测各组瘤体中LUC7L3和Ki-67的蛋白表达情况。3.应用HER2抑制剂Lapatinib（GW-572016）干扰恶性脑膜瘤IOMM-Lee后,q-PCR和Western blot分别检测HER2、ELK1、p-ELK1、LUC7L3的m RNA和蛋白表达情况。4.双荧光素酶报告检测和染色质免疫共沉淀实验来验证LUC7L3启动子与转录因子ELK1之间是否具有结合,以及寻找具体的结合位点。5.使用免疫组织化学法检测70例脑膜瘤石蜡标本和5例正常蛛网膜组织中HER2和LUC7L3的表达水平,验证HER2与LUC7L3间是否存在相关性。结果:1.干扰和过表达恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株LUC7L3后,用q-PCR法检测各组细胞中HER2、ELK1、LUC7L3的m RNA表达水平:干扰组表达水平下降约42.2%,过表达组表达水平升高约51.4%,达到实验分组要求。2.裸鼠成瘤实验中,与空白对照组相比,LUC7L3-sh组的裸鼠成瘤的能力减弱,瘤体增殖的速度减慢,Western Blot及免疫组化的结果显示LUC7L3、Ki-67表达水平均明显下降;LUC7L3-ox组的裸鼠成瘤的能力增强,瘤体增殖的速度加快以及迁移能力加强,Western Blot及免疫组织化学染色结果显示LUC7L3、Ki-67表达水平均明显升高。3.应用HER2抑制剂Lapatinib（GW-572016）干扰恶性脑膜瘤IOMM-Lee后,恶性脑膜瘤细胞IOMM-Lee细胞株中HER2以及LUC7L3的m RNA的表达量均下降了56.5±7%,ELK1的m RNA的表达量下降了43±6%;HER2、P-ELK1以及LUC7L3的蛋白表达水平均降低了73.4±6%,ELK1蛋白表达下降10±2%。4.软件预测分析结果显示:LUC7L3基因启动子区上有15个转录因子ELK1的结合位点。双荧光素酶报告基因和染色质免疫沉淀实验结果证实,转录因子ELK1能与LUC7L3启动子区特异性结合,并且有2个稳定的结合位点。5.用免疫组织化学方法检测正常蛛网膜组织与不同级别脑膜瘤组织中HER2和LUC7L3的蛋白表达,结果表明:脑膜瘤恶性程度越高,HER2蛋白表达越强;LUC7L3在正常蛛网膜组织中也有一定的表达,LUC7L3的蛋白表达与恶性程度无显著差异;HER2与LUC7L3表达呈正相关。结论:1.在恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株中HER2/ELK1信号轴与LUC7L3存在相关性,LUC7L3为HER2/ELK1信号轴的下游靶基因。2.在脑膜瘤组织中,HER2可能与脑膜瘤的恶性程度有关;LUC7L3与脑膜瘤恶性程度无相关性。
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