【摘 要】
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试验采用蛋白酶(蛋白酶A、B、C和D)酶解处理羊血血红蛋白的方法提取生物活性肽,通过体外抑菌试验探索了羊血来源生物活性肽对沙门氏菌、普通大肠杆菌和E.coli K88体外的抑菌效果,建立体内腹泻高致病菌大鼠模型,并使用羊血来源生物活性肽进行体内抑菌试验,旨在为羊血来源生物活性抗菌肽的开发和利用提供一定的理论依据。试验结果表明:1.利用蛋白酶A、B、C和D处理羊血血红蛋白,A蛋白酶酶解4h所得生物活
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试验采用蛋白酶(蛋白酶A、B、C和D)酶解处理羊血血红蛋白的方法提取生物活性肽,通过体外抑菌试验探索了羊血来源生物活性肽对沙门氏菌、普通大肠杆菌和E.coli K88体外的抑菌效果,建立体内腹泻高致病菌大鼠模型,并使用羊血来源生物活性肽进行体内抑菌试验,旨在为羊血来源生物活性抗菌肽的开发和利用提供一定的理论依据。试验结果表明:1.利用蛋白酶A、B、C和D处理羊血血红蛋白,A蛋白酶酶解4h所得生物活性肽的出现抑菌圈,抑菌圈直径分别为沙门氏菌11.58±2.13mm、普通大肠杆菌12.95±2.45mm和E.coli K88 14.45±0.71mm;最小抑菌浓度分别为沙门氏菌18.27μg/mL、普通大肠杆菌 18.27μg/mL 和 E.coli K88 36.54μg/mL。在细胞膜渗透性试验中,随着时间的增加A蛋白酶酶解4 h所得生物活性肽对3种菌细胞通透性的影响也增强;在细胞表面疏水性试验中,试验组与酸性氯仿组无显著性差异(P>0.05),确定A蛋白酶酶解4 h所得生物活性肽具有酸性;在培养液蛋白浓度试验中,3种菌细胞膜被破坏的数量随时间的推移而增加,到6h时达到峰值。2.通过对死亡率和粪便菌落数的测定确定建立体内腹泻高致病菌大鼠模型的最佳灌菌浓度为3×108CFU/mL,最佳灌菌时长为15d。3.选取30只昆明大鼠,将其分为空白对照组、阴性对照组(灌服A肽)、阳性对照组(灌服菌悬液)、试验1组(先灌服菌悬液后灌服A肽)、试验2组(先灌服A肽后灌服菌悬液)、,其中5个不同处理组对大鼠的采食量、体重和血常规指标无显著性差异(P>0.05);粪便菌落数试验期第15d时5个不同处理组粪便中菌落数差异显著(P＜0.05);脾脏指数阳性对照组与其他4个处理组差异性显著(P＜0.05),胸腺指数5个不同处理组无显著性差异(P>0.05);HE染色中灌服E.coli K88菌悬液对肠道组织有不同程度的损害且小肠绒毛长度和隐窝深度均有显著性差异(P<0.05);为大鼠灌服A蛋白酶酶解4h所得生物活性肽可降低空肠匀浆液中TNF-α和IL-6基因表达量。综上所述,A蛋白酶酶解4 h所得生物活性肽对E.coli K88导致的大鼠体内高致病菌环境具有一定的清除作用,可以减缓E.coli K88对机体肠道的损伤情况,因此羊血来源生物抗菌肽在动物体内外均具有良好的抗菌效果,具有被开发的价值。
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