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目的:Tigit是一种表达于淋巴细胞表面的共抑制分子。在肿瘤中,Tigit表达于肿瘤浸润性淋巴细胞表面,与肿瘤细胞CD155结合,激活Tigit信号通路,从而诱导肿瘤免疫耐受。在自身免疫性疾病及慢性感染中,激活Tigit信号通路,可抑制炎性反应,缓解疾病进展。目前Tigit在移植排斥反应中研究甚少。我们推测,当发生移植排斥反应时,Tigit表达会增加。激活Tigit信号通路,可减少IFN-γ分泌,抑制T细胞活化及增殖,减轻移植排斥反应,实现对移植物的保护作用。方法:(1).建立了小鼠皮肤移植模型Balb/c(H-2d)→C57BL/6(H-2b),术后7天,流式检测Tigit在不同组:同种异系排斥组(简称排斥组,graft rejection group)和同种同系对照组(简称对照组,control group)中脾脏淋巴细胞上表达的变化,RT-PCR技术检测Tigit m RNA相对表达水平;用PHA活化术后7天小鼠脾细胞,流式检测Tigit表型在不同组别及不同类型CD4+T细胞表达的相关性。(2).体外实验,分四组:空白组,CD155组,PHA组,PHA+CD155组,将同种异系排斥组(简称排斥组,graft rejection group)和同种同系对照组(简称对照组,control group)小鼠脾脏淋巴细胞分别培养24小时,检测上清中IFN-γ及IL-6的变化;流式检测Tigit在T淋巴细胞上的表达。(3).用抗小鼠CD3e和CD28抗体刺激有CFSE标记的上述排斥组和对照组小鼠脾脏淋巴细胞增殖,分组:CD3e+CD28组和CD3e+CD28+CD155组,培养72小时,流式检测增殖水平。(4).体内实验,分别应用小鼠重组CD155蛋白或PBS,干预给药组(CD155group)和PBS组(PBS group),术后7天,流式检测CD4+T细胞表达CD25,CD69以及分泌IFN-γ水平,利用H&E染色观察移植物病理改变;同时持续观察并记录两组移植物存活的时间。结果:(1).我们在本实验中发现,发生排斥反应时,Tigit在CD4+T细胞、CD8+T细胞上表达升高,在NK细胞上则降低(**P<0.01)。用PHA进一步活化之后,CD4+Tigit+T细胞比CD4+Tigit-T细胞所表达的IFN-γ,CD25,CD69水平均低(*P<0.05);排斥组脾脏Tigit m RNA的相对表达量高于对照组(*P<0.05)。(2).体外实验,用重组小鼠CD155蛋白处理PHA活化后的淋巴细胞,其分泌至上清中的IFN-γ及IL-6水平低于仅PHA活化的对照组(***P<0.001),流式细胞技术检测发现,CD4+T细胞分泌的IFN-γ的水平、表达CD25及CD69细胞比例在PHA+CD155组中要低于PHA组(*P<0.05)。(3).增殖实验中,排斥组和对照组中,CD3e+CD28+CD155组细胞增殖程度均略低于CD3e+CD28组(P>0.05)。(4).体内实验中,发现CD4+T细胞所分泌IFN-γ的水平、表达CD25细胞、CD69细胞比例,给药组(CD155 group)均低于PBS组(PBS group)(**P<0.01)。移植物H&E染色后,发现给药组(CD155 group)小鼠移植物中淋巴细胞浸润程度要轻于PBS组(PBS group)(*P<0.05)。但移植物存活时间,给药组平均时间与PBS组平均存活时间无明显差异。结论:小鼠皮肤移植排斥反应模型中,Tigit在淋巴细胞上表达增多,尤其是CD4+T细胞及CD8+T细胞,而在NK细胞上的表达降低。激活Tigit信号通路可抑制IFN-γ分泌及限制T细胞活化,减轻皮肤移植排斥反应,对小鼠皮肤移植具有保护作用。