论文部分内容阅读
目的：
糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常见的眼部微血管并发症，是导致成年人失明的主要原因之一。根据临床表现和病理特征，DR可分为非增殖期（NPDR）和增殖期（PDR）。目前临床主要以糖代谢异常调节药物、抑制炎症反应、抗氧化剂、激光光凝等方案治疗，但仍然存在其弊端。该病的早期诊断和干预，对延缓病情发展，减少视力损伤和提高患者生活质量具有重要意义。而发现能减缓视网膜血管损伤、闭塞的药物可以为有效干预提供一种选择。川芎在临床上广泛用于糖尿病视网膜病的早期治疗。但有效成分大多不明确。本文旨在从中寻找具有减轻视网膜血管受损和闭塞的先导物，为进一步开发提供实验依据。
方法：
（1）采用95%-70%乙醇提取，系统溶剂法萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位。应用硅胶柱色谱对三部分粗提物进行分段。结合MTT比色法测定川芎各部分粗提物活性。（2）对川芎正丁醇部分进一步采用正相和反相硅胶柱色谱，葡聚糖凝胶柱色谱，高效液相制备等正反向相色谱进行分离纯化，结合理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。（3）采用MTT比色法测定其作用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的半数抑制浓度。（4）探究它们对HUVEC增殖、迁移的促进作用。
结果：
（1）川芎石油醚部位粗提物作用于HUVEC的半数效应浓度（EC50（mg/mL））分别为：34.71±8.91、113.90±4.80、156.06±3.52；乙酸乙酯部位分别为：82.39±3.84、63.26±2.17、96.17±0.97；正丁醇部位分别为：119.53±2.11、25.33±2.46、64.47±1.75。运用单因素方差分析（One way ANOVA）对所得数据进行统计，结果显示Pe.1、Pe.2、Pe.3三部分对HUVEC细胞的增殖具有抑制作用，Ea.1、Ea.2两部分在高浓度时具有抑制作用，在低浓度时表现为促进作用，而Ea.3、Ba.1、Ba.2、Ba.3四部分浓度依赖地促进了HUVEC的增殖。
（2）从川芎正丁醇部位分离并鉴定了20个化合物，分别为大黄酚（Chrysophano）(1)、β-谷甾醇（β-sitosterol）(2)、烟酸（Niacin acid）(3)、4-hydroxy-5-methoxy-benzoic acid（Vanillic acid）(4)、3,4,5-trihydroxybenzoic acid（Gallic acid）(5)、3,4,5-trihydroxybenzoic acid methyl ester（Methyl gallate）(6)、1S-(4′-hydroxyphenyl)-1,2-ethanediol(7)、3-phenyl-2-acrylic acid（Cinnamic acid）(8)、人参碱((-)-(1S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)(9)、咖啡酸（Caffeic acid）(10)、胸腺嘧啶（Thymine）(11)、尿嘧啶（Uracil）(12)、腺嘌呤（Adenine）(13)、Methyl3,4-Dihydroxycinnamate(14)、绿原酸（Chlorogenic acid）(15)、胸苷(16)、腺苷(17)、尿苷(18)、Daidzein7-O-β-D-glucopyranoside(19)和胡萝卜苷(20)。
（3）化合物3、4、5、7、8、10、14、15表现出较弱的细胞毒作用，IC50（μM）分别为：79.34±1.25μM、24.19±2.54μM、20.18±1.17、82.63±0.81、50.29±1.25、73.70±5.01、70.15±3.28、90.38±4.05；化合物6、9、11、16几乎无细胞毒作用（IC50≥100μM），IC50（μM）分别为：112.43±2.64、102.54±2.15、225.63±3.16、100.26±4.12。
（4）化合物6、9、11、16在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L时，对HUVEC具有增殖作用，其EC50分别为36.17±3.01、42.53±3.69、89.71±1.98、和67.82±3.02。化合物14在浓度为200μmol/L、100μmol/L时，对HUVEC具有增殖作用，其EC50为103.21±3.76，但作用不明显。
（5）化合物11在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50为45.32±3.52；化合物6、9在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50分别为39.51±2.06、71.16±1.68；化合物14、16在浓度为200μmol/L、100μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50分别为82.59±2.66、92.47±0.76。
结论：
（1）川芎乙酸乙酯、正丁醇各部分粗提物在一定浓度范围内对HUVEC细胞的增殖具有促进作用。（2）从正丁醇部位分离得到20个化合物，其中蒽醌类化合物1个，有机酚酸类化合物8个，生物碱类化合物7个，其它化合物4个。（3）化合物6、9、11、14、16能够促进内皮细胞的增殖和迁移。
糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是糖尿病最常见的眼部微血管并发症，是导致成年人失明的主要原因之一。根据临床表现和病理特征，DR可分为非增殖期（NPDR）和增殖期（PDR）。目前临床主要以糖代谢异常调节药物、抑制炎症反应、抗氧化剂、激光光凝等方案治疗，但仍然存在其弊端。该病的早期诊断和干预，对延缓病情发展，减少视力损伤和提高患者生活质量具有重要意义。而发现能减缓视网膜血管损伤、闭塞的药物可以为有效干预提供一种选择。川芎在临床上广泛用于糖尿病视网膜病的早期治疗。但有效成分大多不明确。本文旨在从中寻找具有减轻视网膜血管受损和闭塞的先导物，为进一步开发提供实验依据。
方法：
（1）采用95%-70%乙醇提取，系统溶剂法萃取得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位。应用硅胶柱色谱对三部分粗提物进行分段。结合MTT比色法测定川芎各部分粗提物活性。（2）对川芎正丁醇部分进一步采用正相和反相硅胶柱色谱，葡聚糖凝胶柱色谱，高效液相制备等正反向相色谱进行分离纯化，结合理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。（3）采用MTT比色法测定其作用于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的半数抑制浓度。（4）探究它们对HUVEC增殖、迁移的促进作用。
结果：
（1）川芎石油醚部位粗提物作用于HUVEC的半数效应浓度（EC50（mg/mL））分别为：34.71±8.91、113.90±4.80、156.06±3.52；乙酸乙酯部位分别为：82.39±3.84、63.26±2.17、96.17±0.97；正丁醇部位分别为：119.53±2.11、25.33±2.46、64.47±1.75。运用单因素方差分析（One way ANOVA）对所得数据进行统计，结果显示Pe.1、Pe.2、Pe.3三部分对HUVEC细胞的增殖具有抑制作用，Ea.1、Ea.2两部分在高浓度时具有抑制作用，在低浓度时表现为促进作用，而Ea.3、Ba.1、Ba.2、Ba.3四部分浓度依赖地促进了HUVEC的增殖。
（2）从川芎正丁醇部位分离并鉴定了20个化合物，分别为大黄酚（Chrysophano）(1)、β-谷甾醇（β-sitosterol）(2)、烟酸（Niacin acid）(3)、4-hydroxy-5-methoxy-benzoic acid（Vanillic acid）(4)、3,4,5-trihydroxybenzoic acid（Gallic acid）(5)、3,4,5-trihydroxybenzoic acid methyl ester（Methyl gallate）(6)、1S-(4′-hydroxyphenyl)-1,2-ethanediol(7)、3-phenyl-2-acrylic acid（Cinnamic acid）(8)、人参碱((-)-(1S,3S)-1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)(9)、咖啡酸（Caffeic acid）(10)、胸腺嘧啶（Thymine）(11)、尿嘧啶（Uracil）(12)、腺嘌呤（Adenine）(13)、Methyl3,4-Dihydroxycinnamate(14)、绿原酸（Chlorogenic acid）(15)、胸苷(16)、腺苷(17)、尿苷(18)、Daidzein7-O-β-D-glucopyranoside(19)和胡萝卜苷(20)。
（3）化合物3、4、5、7、8、10、14、15表现出较弱的细胞毒作用，IC50（μM）分别为：79.34±1.25μM、24.19±2.54μM、20.18±1.17、82.63±0.81、50.29±1.25、73.70±5.01、70.15±3.28、90.38±4.05；化合物6、9、11、16几乎无细胞毒作用（IC50≥100μM），IC50（μM）分别为：112.43±2.64、102.54±2.15、225.63±3.16、100.26±4.12。
（4）化合物6、9、11、16在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L时，对HUVEC具有增殖作用，其EC50分别为36.17±3.01、42.53±3.69、89.71±1.98、和67.82±3.02。化合物14在浓度为200μmol/L、100μmol/L时，对HUVEC具有增殖作用，其EC50为103.21±3.76，但作用不明显。
（5）化合物11在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50为45.32±3.52；化合物6、9在浓度为200μmol/L、100μmol/L、50μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50分别为39.51±2.06、71.16±1.68；化合物14、16在浓度为200μmol/L、100μmol/L时，对HUVEC具有促进迁移作用，其EC50分别为82.59±2.66、92.47±0.76。
结论：
（1）川芎乙酸乙酯、正丁醇各部分粗提物在一定浓度范围内对HUVEC细胞的增殖具有促进作用。（2）从正丁醇部位分离得到20个化合物，其中蒽醌类化合物1个，有机酚酸类化合物8个，生物碱类化合物7个，其它化合物4个。（3）化合物6、9、11、14、16能够促进内皮细胞的增殖和迁移。