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联用技术已经成为元素形态分析中应用最广泛的方法。高效液相色谱和原子光谱联用是联用技术中发展最快、应用最多的联用技术。硒元素是一个典型的双功能元素,当生物体内硒含量太低时,会出现硒缺乏症状;而硒含量太高时,又有可能导致硒中毒;不仅如此,生物体对硒的吸收和代谢与其存在的形态有密切的关系。硒形态分析的分析方法学研究已成为元素形态分析研究领域的一个热点。本论文主要贡献是提出硫脲（TU）在线预还原六价硒（Se（Ⅵ））的方法、并研究了可能的还原机制;所提出的“在线一动力学控制预还原”方法与传统硼氢化钾/盐酸（KHB4/NaOH-HCl）氢化物发生（HG）体系联合使用,作为离子对高效液相色谱（IP-HPLC）和非色散原子荧光光谱（AFS）联用技术的接口成功地应用于生物样品中硒形态分析。此外建立了HPLC与动态反应池电感耦合等离子体质谱（DRC ICP-MS）联用的方法并应用于血液样品中硒代氨基酸的分析。本论文含三个部分:第一章首先对硒在自然界中的存在及其生物学功能进行了阐述,解释了硒形态分析工作的重要性和现实意义。其次,对硒形态分析中采用的各种联用技术方法进行了详细的介绍,分为分离方法、接口技术、检测技术以及样品处理和保存方法等几部分。第二章发展了TU在线预还原Se（Ⅵ）的新方法;解决了Se（Ⅵ）直接KBH4/NaOH-HCl还原效率太低的、无法直接在线进样的困难。经在线TU预还原,Se（Ⅵ）的发生效率提高了10倍以上。并以此为接口,建立了IP-HPLC分离,TU预还原HG-AFS检测体系,对四种常见的硒形态硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、亚硒酸和硒酸进行分离检测。并将建立的方法成功地应用于富硒酵母、培养的富硒大蒜和标准参考物质NIST1946（冷冻鱼器官）中硒形态分析。第三章建立了HPLC和DRC ICP-MS联用的分析方法对高硒地区,湖北省恩施自治州湖北民族学院附属医院门诊患者血浆中含硒蛋白的酶解产物中的硒代氨基酸进行形态分析,结果显示样品血浆中硒代半胱氨酸的含量基本保持在一定范围;而硒代蛋氨酸的浓度有很大差异,其浓度与总硒含量呈正相关。