铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因独特,代谢产物复杂,是医院内重要的条件致病菌,也是农业生产中重要的生物防治菌。主要发挥生防作用的是其分泌的吩嗪类次级代谢产物,因此,吩嗪含量的高低是评价铜绿假单胞菌生防价值的重要指标。本研究所用材料为实验室成员自牛大力(Millettia specisoa Champ)根部分离到的一株铜绿假单胞菌2016NX1。本文首先用氯仿对菌株2016NX1的上清液进行抽提,获得蓝色粗提物。其次利用硅胶柱层析法(以氯仿-硅胶匀浆作为固定相,氯仿:甲醇(v/v)=15:1作为流动相)分离蓝色粗提物、利用TCL薄层层析法(硅胶为固定相,展开剂为氯仿:甲醇(v/v)=15:1)对分离到的组分进行检测,初步分离铜绿假单胞菌粗提物中的组分。然后以制备型高效液相色谱仪纯化组分。最后以核磁共振仪鉴定组分,结果显示,蓝色粗提物的主要组分包括1-羟基吩嗪和环四肽Cereusitin A。由于野生菌株2016NX1的吩嗪产率较低(约200 mg/L),因此本文构建了高产吩嗪的工程菌株。选择铜绿假单胞菌2016NX1中调控吩嗪合成的phzR基因(吩嗪合成代谢调控基因,transcriptional regulator phzR)作为目的基因。根据其它生物phzR基因的保守核苷酸序列,设计并合成特异引物,以2016NX1菌株的基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得phzR核心片段。然后利用Genome Walking技术扩增phzR基因5’末端。根据核心片段与5’末端的拼接结果,设计引物扩增从起始密码子到终止密码子的phzR基因完整序列。将phzR基因全长克隆至表达载体pBBR1MCS-5的强启动子lac promoter下游,然后转化野生菌株2016NX1以增加其phzR拷贝数,成功构建了菌株2016NX1的工程菌株2019NES。利用紫外-可见分光光度计对工程菌株2019NES与野生菌株2016NX1的吩嗪含量进行测定,结果表明2019NES菌株的吩嗪含量高于2016NX1菌株44.39%。