早泄（premature ejaculation,PE）是男子性功能障碍中仅次于男性勃起功能障碍的最常见的症状。对早泄的治疗,目前一般采用行为疗法、局部麻醉法、三环类抗抑郁药和选择性5羟色胺再摄取抑制剂。然而,没有一种疗效得到广泛地认可。国内外研究报道称[4、5、6]主要用于男性勃起功能障碍治疗的选择性磷酸二酯酶5型抑制剂（PDE5i）西地那非（Sildenafil,Sil）对早泄的症状也有明显的改善,但是具体机制不清楚,推测在输精管、前列腺、精囊、后尿道平滑肌上存在5型磷酸二酯酶（PDE5）。有假说认为西地那非可能通过NO-cGMP途径使cGMP水平升高,抑制输精管收缩,使射精潜伏期延长,从而达到治疗早泄的目的。本文从离体器官、组织、分子三个水平,探讨西地那非治疗早泄的机制,为临床应用提供依据。一、西地那非对大鼠输精管的舒张作用及作用机制本部分直接观察Sildenafil对大鼠离体输精管收缩功能的影响,并且与硝普纳（SNP,NO供体剂）、左旋精氨酸（L-argine,NO前体剂）对大鼠输精管的作用进行了比较。进而利用一氧化氮合酶（NOS）抑制剂左旋N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）探讨Sil舒张输精管的途径。此外,观察了Sil对去甲肾上腺素（NE）引起输精管收缩的影响。1.在分别用0.05Hz,3ms,40V电刺激[7]诱导收缩和用80mmol?L-1的高浓度KCl[8]诱导收缩的大鼠输精管标本上,以0.1～100μmol?L-1Sil直接作用于输精管,均可浓度依赖性地引起舒张效应（p<0.05）,EC50分别为9.82μmol?L-1和46.9μmol?L-1。而NO供体剂SNP和NO前体剂L-argine均对两种收缩条件下输精管的收缩反应没有舒张效应（p>0.05）。2.在分别用0.05Hz,3ms,40V电刺激诱导收缩和用80mmol·L^-1的高浓度KCl诱导收缩的大鼠输精管标本上,当NO合酶抑制剂L-NAME(0.1mmol·L^-1)存在时,以0.1～100μmol·L^-1Sil作用于输精管,各浓度舒张效应均减弱。电刺激收缩下Sil最大舒张效应由（87.27±1.91 ）%降低到（68.02±2.29）% （p<0.05）。KCl收缩下,Sil最大舒张效应由（87.46±3.87 ）%降低到（72.99±4.23） %（p<0.05）。而EC50分别增加到(45.7μmol·L^-1)（p<0.05）和(63.2μmol·L^-1)（p<0.05）。3.Sil(10-4 mol·L^-1)能够使去甲肾上腺素（NE）的量效曲线右移（p<0.05）,呈非竞争性抑制,NE的最大收缩幅度由（279.47±16.43）mg降低到（160.45±10.82）mg。结果提示:Sil可以直接舒张输精管平滑肌,其机制与输精管上NO-cGMP信号通路有关,但也同时存在非NO依赖的舒张机制。二、西地那非对大鼠输精管中环核鸟苷酸水平的影响环核苷酸cGMP是普遍存在于生物体内的第二信使。NO-cGMP通路信号的增强,会导致cGMP浓度的增加。为了进一步研究Sil的作用机制,采用125I放射免疫测定法[9],在不同的条件下,即无激发剂、有cGMP激发剂硝普纳（SNP）存在时,观察Sil对大鼠输精管组织中cGMP水平的影响。结果表明:在没有激发剂存在时,Sil能浓度依赖性升高cGMP的含量（p<0.05）。而在SNP存在的基础条件下,Sil能显著提高输精管组织中cGMP的浓度,表现出浓度依赖性（p<0.05）。且100μmol·L^-1的Sil使cGMP含量从13.07p mol?mg-1的基础含量增加到107.89pmol?mg-1,cGMP含量升高了8倍（p<0.05）。用NOS抑制剂L-NAME(0.1m mol·L^-1)预孵育输精管组织后,100μmol·L^-1Sil不能使cGMP浓度升高,与空白组无差异（p>0.05）,Sil升高cGMP的作用几乎被完全抑制。提示Sil治疗早泄与影响输精管上NO-cGMP信号通路有一定的关系,可以通过抑制PDE5,提高平滑肌组织中cGMP水平,从而舒张输精管,发挥治疗早泄的作用。三、西地那非对大鼠输精管中5型磷酸二酯酶mRNA表达水平的影响尽管只有cGMP和cAMP两种底物,组织中磷酸二酯酶（PDEs）却有多达11个家族成员（PDE1-PDE11）,由21个基因编码而来,每个基因编码编码多个同工酶。这11种PDEs中PDE5,PDE6和PDE9仅水解cGMP。[10]有报道称[11]不仅在阴茎上有PDE5的大量转录表达,在其它雄激素依赖的组织如输精管也有PDE5存在。有研究证实在人和兔子的输精管上有PDE5存在,且呈雄激素依赖性表达。人输精管PDE5表达和活性明显低于阴茎,但是已经足够水解cGMP并对NO引起的平滑肌舒张起负性调节作用。[12]和阴茎上一样,免疫组化的方法[13]发现PDE5几乎存在于平滑肌全层,生理上调节输精管收缩。因此,认为PDE5i可以延长射精潜伏期,被认为是治疗PE新的治疗选择。迄今为止在输精管上对PDE5同工酶的表达情况未见相关报道,同时为了建立一种早泄动物模型（大鼠）,补充PDE5在输精管上表达的种属资料,有必要对大鼠输精管的PDE5同工酶进行检测鉴别。且为了进一步探讨Sil对输精管上NO-cGMP通路中关键的下游调节因素（PDE5）在mRNA表达水平的影响,本部分设计了同工酶特异性的寡核苷酸引物[9],应用RT-PCR的方法检测出大鼠输精管有PDE5A1和PDE5A2 mRNA的表达,并且研究了Sil对大鼠输精管PDE5 mRNA表达水平的影响。PDE5A1扩增片段全长345bp,上游引物序列为P1:TGA TCA CCG GGA CTT TAC CT;PDE5A2扩增片段全长327bp,上游引物序列为P2:TGC TAT GTT GCC CTT TGG AG,PDE5A1和PDE5A2共同的下游引物序列为P3:GAG CAC TGG TCC CCT TCA。β-actin扩增片段全长368bp,上游序列为P4:TCT ACA ATG AGC TGC GTG TG,下游序列为P5:AAT GTC ACG CAC GAT TTC CC。结果表明,大鼠输精管中有PDE5A1和PDE5A2 mRNA的表达。与内参照β-actin相比,对照组、Sil孵育1.5h组和Sil孵育3h组的PDE5A1及PDE5A2基因mRNA表达量分别为:对照组0.65±0.04（PDE5A1）, 0.56±0.03（PDE5A2）;Sil孵育1.5h组0.52±0.01（PDE5A1）, 0.48±0.01（PDE5A2）;Sil孵育3h组0.44±0.01（PDE5A1）,0.36±0.02（PDE5A2）。用药后PDE5A1和PDE5A2的mRNA表达均比对照组减少,Sil孵育1.5h组降低了20%（PDE5A1）和15%（PDE5A2）,Sil孵育3h组降低了32%（PDE5A1）和35%（PDE5A2）。提示Sil对输精管的NO-cGMP信号通路的下游关键酶（PDE5）具有一定的调控作用。这是Sil治疗早泄的分子机制之一。综上所述:Sil可以直接舒张输精管平滑肌,通过对输精管NO-cGMP信号通路的下游关键酶（PDE5）的调控作用,提高平滑肌组织中cGMP水平,发挥治疗早泄的作用。其舒张输精管治疗早泄的机制也同时存在非NO依赖的途径。